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一般实验室使用，仅用于体外 无内毒素质粒大量制备试剂盒 （离心柱型） 用于大规模质粒制备（max preparations） 目录号：DP2801 5次制备 目录号：DP2802 10次制备 使用手册 2005年9月，第3版 深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 地 址：深圳市南山区桃源街道留仙大道1183号南山云谷创新产业园综合服务楼506-508 电 话：0755传真：0755-8655 0193 网 址： 深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation  一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 5 次（DP2801） 10 次（DP2802） RNase A －20℃ 400µl(10mg/ml) 750µl(10mg/ml） 溶液 P1 4℃ 50 ml 100 ml 溶液 P2 室温 50 ml 100 ml 溶液 P3 室温 75 ml 150 ml 结合液 PB 室温 80 ml 160 ml 去蛋白液 PE 室温 50 ml 100 ml 漂洗液 WB 室温 25 ml 50 ml 第一次使用前请加入指定量无水乙醇 内毒素清除剂 4℃（一个月） 20 ml 40 ml －20℃（长期） 洗脱缓冲液 EB 室温 15 ml 20 ml 吸附柱 AC 室温 5 个 10 个 收集管（50ml） 室温 5 个 10 个 �{试剂盒在室温储存 18 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 第一次使用时，将试剂盒所带全部的 RNase A 加入溶液 P1 后（终浓度 100ug/ml）置 于 4℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可�\会有混杂有微量 RNA 残 留， 这时可在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。 2． 第一次使用前请先在漂洗液 WB 瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时 在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 3． 环境温度低时溶液 P2 中 SDS 可�\会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热�{分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 4． 避免试剂长时间�\露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 -1- 六、疑难解答（Trouble shooting） 出现的问题 可�\的原因 建议解决方法 质粒DNA产量低 培养基中忘加抗生素，非 确保固体，液体培养基中都加 质粒转化细胞过度生长 入了适当的抗生素。 细菌培养时间太长，老化 接种过夜培养板的新鲜单菌落 细菌开始裂解 于加了合适抗生素的培养基中 培养 12-16 个小时。 使用了低拷贝数质粒 建议使用高拷贝数质粒，低拷 贝数质粒应该适当加大处理体 积。 细菌培养时间过短，菌液 细菌培养到[A600 ]吸光值为 2-4 内细菌浓度过低 的时候收集菌体。 细菌细胞裂解不完全 使用建议的菌体处理量处理菌 体，不要过量；涡旋或者吹打， 确保菌体充分重悬于溶液 P1 中，不应该见到未散开的细菌 团块；加入裂解液 P2 裂解后， 应该是粘稠和透明的。 质粒 DNA 产量使用分光 分光光度计定量常常偏高，使 光度计定量不准确 用琼脂糖电泳/EB 染色定量。 洗脱效率不高 请阅读实验步骤 15 和注意事 项 6 未提取到质粒DNA 漂洗液 WB 中忘记加无水 第一次实验时，在漂洗液 WB 乙醇 中加入指定量无水乙醇。 质粒洗脱液含有较多乙 确保已经做了步骤 14，将离心 醇，琼脂糖电泳/EB 染色 吸附柱的乙醇残留去除；或者 定量时质粒 DNA 漂出上 适当提高上样缓冲液浓度。 样孔 -6- 接前�\ 出现的问题 可�\的原因 建议解决方法 质粒DNA下游酶切 忘记做步骤 14，乙醇�}制 做步骤 14，然后空气中晾�{分钟， 不�\切开或者酶切 了酶切反应 让残留乙醇挥发。 不完全 一些硅基质膜成分一起洗 将洗脱的质粒 DNA 溶液 13，000rpm 脱下来，�}制了酶切反应 再离心一分钟，小心取上清使用， 质粒DNA降解，或者 核酸酶活性太高 确保已经做了步骤 11，使用去蛋白 无质粒DNA 液 PE 去除了核酸酶。 混杂有基因组D