微生物之观察原理：光学显微镜之原理与构造利用凸透镜之组合.DOC

微生物之觀察 原理： 　　光學顯微鏡之原理與構造，利用凸透鏡之組合，達到放大效果，其原理有： 　　　１．放大（magnification）：為目鏡與物鏡之乘積，為其組合放大倍率。 　　　２．解像力（resolving power)：為分辨兩點之間最小距離，如人眼在3公尺外分辨0.1 　　　　　㎜之兩點為極限。 　　　３．照明（illumination)：人工光線或自然光源。 　　　４．工作距離（working distance）：物鏡和玻片間之距離。 　　瞭解光學顯微鏡後，讓同學們練習顯微鏡的操作方法，並藉由實際的觀察的知各種微生物的外型輪廓、粗略型態及內部構造。 　　本實驗所觀察的微生物包括：教學玻片、學校的汙水處理場、噴水池中的藍綠細菌、藻類、原生動物…等地方的微生物。 接目鏡一般皆為10X時： 接物鏡倍數 4X 10X 40X 100X 放大倍數 40X 100X 400X 1000X 刻度大小長度 25μm 10μm 2.5μm 1μm 實驗儀器、設備 器材： 　　１．拭鏡紙。 　　２．塑膠滴管。 　　３．蓋玻片。 　　４．載玻片。 　　５．洗滌瓶。 　　６．燒杯。 　　７．光學顯微鏡。 水樣來源： 　　　　學校污水處理廠之廢水 實驗步驟 １．取出教學玻片置於顯微鏡之載物台上。 ２．將接物鏡由最低倍（4x）看起，調整粗、細調整輪（速度不要太快，以免壓壞很貴的教 　　學玻片，壞了要賠喔! 所以要小心操作）。 ３．當影像清晰時，可將接物鏡調到較高倍數（10X，40X） 觀察，正常狀況下只要調細調 　　節輪即可。 ４．將觀測到之微生物其外型、特徵、大小等如實記錄，並要記錄所使用之放大倍率。 ５．比對在其他水環境中（如崑山湖、噴水池等）之微生物種類，依方法記載其地點及微生 　　物之種類、大小等。 問題與討論 １．說明光學顯微鏡的操作步驟。 　　　一．顯微鏡的取用： 　　　　　　一手握鏡臂，一手托住鏡座，將顯微鏡輕輕放置在桌上，距桌緣約一個母指距 　　　　　　離之處，調整座椅至適當高度，使自己可以輕鬆使用顯微鏡，取95%酒精及拭 　　　　　　鏡紙將所有的鏡頭擦拭乾淨，將玻片標本平穩地放在載物台上以璃片夾夾好。 　　　二．低倍鏡的使用： 　　　　１．先將載物台降至最低點，轉動旋轉盤，使低倍鏡位於鏡筒下方，打開光源，調 　　　　　　整光源調整鈕及光圈，使視野中之亮度適當，將所有要觀察的載玻片放在載物 　　　　　　台上，以玻片夾夾好，並轉動調節輪以調整玻片位置。 　　　　２．轉動調節輪，至低倍鏡與載物台相距約0.1cm為止，由接目鏡觀察，同時以靠 　　　　　　向自己的方向緩緩移動調節輪，使載物台下降，直到影像清晰為止，若是視野 　　　　　　太亮或太暗，皆可以調整光源調整鈕及光圈，使視野中之亮度適當。 　　　三．高倍鏡的使用： 　　　　　　先使用低倍鏡找到欲觀察的目標，將該部位調整至視野中央，重複”低倍鏡的 　　　　　　使用”方法。 　　　四．注意事項： 　　　　１．嚴禁單手提取顯微鏡，若需移動顯微鏡，務必將顯微鏡提起放再放置適當位置， 　　　　　　嚴禁推動顯微鏡，使用顯微鏡請務必小心輕放。 　　　　２．使用顯微鏡時座椅地高度應適當，觀察時更應習慣雙眼同時觀察，且光圈及光 　　　　　　源亮度接應適當，否則長時間觀察時極易感覺疲勞，轉動旋轉盤務必將載物台 　　　　　　降至最低點，以免因操作不當兒刮傷接目鏡之鏡頭，標本染色或其他任何操作 　　　　　　接應將玻片取下，做完後在放回載物台觀察，切勿在載物上操作，以免染劑或 　　　　　　其他液體流入顯微鏡內部或傷及鏡頭。 ２．如何計算光學顯微鏡的放大倍數？對同一檢體來說，不同放大倍數所觀察的微生物有何 　　不同？實驗中所觀察的微生物需放大多少倍才可看到？ 　　　一．顯微鏡內刻度尺之大小對照表。 接物鏡倍數 4X 10X 40X 100X 放大倍數 40X 100X 400X 1000X 刻度大小長度 25μm 10μm 2.5μm 1μm 　　　二．大倍數所看到微生物內部構造比較清楚。 　　　三．我們在實驗中以40倍接物鏡放大看的比較清楚。 ３．利用光學顯微鏡與相位差顯微鏡觀察微生物檢體時，所觀察的結果有何不同？ 　　　一．相位差顯微鏡，要以普通生物鏡來觀察有無色透明構造的標本活體本，若標本不 　　　　　經染色則觀察上會有所困難。 　　　　　相位差顯微鏡就是因應要觀察這樣的標本而生，因為標本可不經染色，所以標本 　　　　　的準備及觀察程序上能更快速達成。相位差顯微鏡除了有普通微生物顯微鏡所有 　　　　　的機構配備外，另外裝有相位差板及相位差專用物鏡，相位差板裝於標本載物一 　　　　　動台的下方取代普通光圈聚光鏡，相位差專用物鏡則取代普通物鏡裝設，通過這 　　　　　些相位差機構及標本的