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《中药(天然药物)分析》 第四章 色谱分析法的应用 色谱法（Chromatography）是一种物理或物理化学的分离分析方法。形成气相色谱、液相色谱、薄层色谱、离子色谱、亲和色谱、超临界流体色谱、毛细管电泳、电色谱等分支。各种色谱仪器与质谱、红外、核磁等技术联用创立了复杂混合物分析的新手段，成为发展最快、应用最广的分析方法之一。 由于色谱分析具有分离与“在线”分析两种功能，能很好的排除组分间的相互干扰，逐个将组分进行定性、定量分析，还能制备纯成分，因此在药物分析中，特别是中药材、中成药、复方制剂分析、痕量分析、杂质检查、药材鉴别时，一般首选色谱分析法。各国药典都大量收载色谱法就是很好的证明。 分离原理主要是利用物质在流动相与固定相两相中的分配系数差异、吸附与解吸差异或其他差异而被分离。 当两相相对运动时，样品中的各组分将在两相中多次分配（可达2000~100万次），这样就使得原来那种微小的性质差异，产生很大的分离效果，分配系数大的组分迁移速度慢，反之分配系数小的组分迁移速度快而被分离。 色谱法主要是一种分离技术，基础是“差速迁移”。 第一节 色谱法的分类与 柱色谱法、纸色谱法的应用 一．色谱法的分类 1．按两相所处的状态分类 （1）气相色谱法（gas chromatography，GC）； （2）液相色谱法（liquid chromatography，LC）; （3）超临界流体色谱法（supercripical fluid chromatograph，SFC）。 2．按操作方法分类 （1）柱色谱法（column chromatography） （2）纸色谱法（paper chromatography） （3）薄层色谱法（thin-layer chromatography） 纸色谱法和薄层色谱法亦称为平面色谱法（planar chromatography） 3．按分离原理分类 （1）吸附色谱法（adsorption chromatography）利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。吸附色谱有GSC和LSC等。 （2）分配色谱法（partition chromatography）利用固定液对不同组分分配性能的差异而使之分离的色谱法称为分配色谱法。分配色谱法有GLC和LLC等。 （3）离子交换色谱法（ion exchange chromatography，IEC） 是用离子交换树脂作固定相，利用树脂上离子交换基团对样品离子交换能力的差别而使之分离的色谱法称为离子交换色谱法。 （4）尺寸排阻色谱法（size exclusion chromatography，SEC） 用多孔凝胶作固定相，利用凝胶孔穴对不同尺寸的分子排阻效应的差别使之分离的色谱法称为尺寸排阻色谱法。 （5）亲和色谱法（affinity chromatography）用具有生物活性的配位基（如抗体、酶等）键合到非活性载体或基质表面构成固定相，利用生物分子与固定相表面上配位基的专属亲和力使之分离的色谱法称为亲和色谱法。 （6）毛细管电泳法（capillary electrophoresis，CE）样品在毛细管的液体介质中，在电场力作用下的分离分析方法称为毛细管电泳法。 （7）毛细管电色谱法（capillary electro- chromatography，CEC）分离机制是靠色谱与电场两种作用力，依据样品组分的分配系数及电泳速度的差别使之分离的色谱法称为毛细管电色谱法。 二．柱色谱法的应用 2.洗脱剂的选择 所用溶剂的吸附力应较弱，一般石油醚、苯、氯仿等为弱洗脱剂；乙醚、异丙醚为中等强度的洗脱剂；低分子量醇及酮为强洗脱剂。 对未知样品的洗脱，常先试用石油醚、石油醚-苯不同比例的混合液、苯、苯-乙醚混合液、乙醚、乙醚-甲醇混合液及甲醇等。物质被洗脱出的先后顺序一般是：饱和烃、烯烃、双烯烃、芳烃、醚、酯、酮、醇及羧酸。 3.吸附剂应具备的条件 （1）能可逆地吸附待分离的物质； （2）不会引起被吸附物质的化学变化； （3）吸附剂的粒度适当，能使洗脱剂以一定速率流出（5~6ml/min）。 常用吸附剂的种类 （1）硅胶 （2）氧化铝 （3）大孔树脂 （4）硅藻土 （5）Sephadex LH 20 （6）C-18,C-8 色层的分离 可以采用推出法和洗脱法。色带的检出可以采用直观（有色物质）、紫外光照射，采用含荧光素的吸附剂，用显色剂显色。 大孔树脂 分离中药水溶性成分的优势