【发酵工程】第四章 染菌.ppt

2、分析：母瓶无菌斜面正常，不接种的白料无菌试验罐也染菌（种子原因排除），消后无菌斜面正常，接种后12小时左右的斜面能镜检出杂菌（操作原因基本排除）。罐体内只有一取样管和一空气管，较干净，蒸汽压力和仪表温度对应良好，消毒工都有十几年的工作经验，操作问题不大（为了排除操作问题，共同消了几个罐，无菌仍不正常）。判断有罐体内可能有料垢或死角。 3、结论： 根据在生产中碰到和解决的无菌问题来看，靠罐阀的检修不到位造成的染菌站15％左右，包括密封垫脱落、老化，阀头脱落，外漏，内漏等等，作大生产，要不有钱买好设备，要没钱必须要有好的制度和好的操作工。根据生产经验看，买好设备要划算的多，染一罐少则损失几百元，多则几十万。 四、染噬菌体的防治 （一）染噬菌体对发酵的影响 发酵过程中如果受噬菌体的侵染，一般发生溶菌，随之出现发酵迟缓或停止，而且受噬菌体感染后，往往会反复连续感染，使生产无法进行，甚至使种子全部丧失。 染噬菌体表现为： 1、镜检可发现菌体数量明显减少，菌体不规则，严重时完全看不到菌体，且是在短时间内菌体自溶。 2、发酵pH值逐渐上升，4~8小时之内可达8.0以上，不再下降。 3、发酵液残糖高，有刺激臭味，粘度大，泡沫多。 4、生产量甚少或增长缓慢或停止 有无染噬菌体，根本的要做噬菌斑检验 （二）产生噬菌体的原因 通常在工厂投产初期并不感到噬菌体的危害，经过1~2年以后，主要是由于生产和试验过程中不断不加注意地把许多活菌体排放到环境中去，自然界中的噬菌体就在活菌体中大量生长，造成了自然界中噬菌体增殖的好机会。这些噬菌体随着风沙尘土和空气流动传播，以及人们的走动、车辆的往来也携带着噬菌体到处传播，使噬菌体有可能潜入生产的各个环节，尤其是通过空气系统进入种子室、种子罐、发酵罐. 在培养皿上倒入培养生产菌的培养基（加琼脂）作下层。同样的培养基中加入20％～30％培养好的种子液，再加入怀疑染噬菌体的发酵液，摇均匀后，铺上层。培养过夜观察培养皿上是否出现噬菌斑。 也可以在上层培养基中不加怀疑染噬菌体的发酵液，而将发酵液直接点种在上层培养基表面，培养过夜，观察有无透明圈出现。 （三）染噬菌体的检测 （三）噬菌体的防治 1、必须建立工厂环境清洁卫生制度，定期检查、定期清扫，车间四周有严重污染噬菌体的地方应及时撒石灰或漂白粉。 2、车间地面和通往车间的道路尽量采取水泥地面。 3、种子和发酵工段的操作人员要严格执行无菌操作规程，认真地进行种子保管，不使用本身带有噬菌体的菌种。感染噬菌体的培养物不得带入菌种室、摇瓶间。 4、认真进行发酵罐、补料系统的灭菌。严格控制逃液和取样分析和洗罐所废弃的菌体。对倒罐所排放的废液应灭菌后才可排放。 5、选育抗噬菌体的菌种，或轮换使用菌种。 6、发现噬菌体停搅拌、小通风，将发酵液加热到70~800C杀死噬菌体，才可排放。发酵罐周围的管道也必须彻底灭菌。 小 结 染菌对发酵的危害： 干扰生产菌的正常代谢，降低产量； 改变pH，降解某些产物； 污染不同的微生物，不同阶段染菌危害不同。 染菌对提炼的危害： 过滤困难而大幅度降低过滤收率； 有机溶剂萃取时发生乳化； 离子交换树脂分离时，降低树脂的交换容量。 染菌原因 设备渗漏 空气带菌 种子带菌 灭菌不彻底 技术管理不善 染菌后的措施 染菌防治 发酵液必须灭菌后才可放下水道； 寻找染菌的原因； 染菌厉害时，车间环境要用石灰消毒。 产生噬菌体的原因：活菌体随意排放，造成噬菌体的感染源 噬菌体的防治 噬菌体危害：造成断种，无法生产 建立工厂环境清洁卫生制度； 感染噬菌体的培养物不得带入菌种室、摇瓶间； 发现噬菌体停搅拌、小通风，将发酵液加热到；70~800C杀死噬菌体，才可排放； 环境用漂白粉消毒； 选育抗噬菌体的菌种； 染菌对发酵有什么危害，对提炼有什么危害？ 有哪些原因会引起染菌？ 染菌以后应采取什么措施？ 为什么会感染噬菌体？感染了噬菌体后应采取哪些措施？ 染菌是如何判断出来的？ 思考题 二、发酵工业的无菌技术——灭菌方法 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 化学药剂灭菌法 过滤除菌法 火焰灭菌法 灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法 2、空气带菌 从日本工业技术院和上海第四制药厂分析空气带菌而造成的染菌分别为19.96％和 26%。国内外空气除菌技术虽已有较大改善，但仍然没有使染菌率降低到理想的程度。因为空气除菌系统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。 3、种子带菌 加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带菌是可以克服的。种子培养过程染菌与发酵一样有许多因素造成。 分为种子本身带菌和种子培养过程中染菌。 4、灭菌不彻底 灭菌技