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半薄切片技术介绍 半薄切片图片 钙化骨组织切片 眼球附近组织的连续切片 半薄切片：(厚度为 0.5μm ～ 1μm ) 半薄切片进行光学显微镜观察的目的： ①可以根据半薄切片精确定位。 ②了解样品包埋质量，以确定是否继续做超薄切片； ③与石蜡切片、超薄切片进行对比研究 半薄切片的优点： ❤克服了超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性 ❤清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像 ❤也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。 电镜超薄技术中如何应用呢？ 电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品，造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在做超薄切片前要做半薄切片来进行定位。 应用： 胚胎学，病理学，动植物细胞学研究中一种普遍的切片方式 半薄切片主要步骤 ★取材 ★固定 ★漂洗、脱水 ★渗透、包埋 ★半薄切片 ★半薄切片染色 每一步都是关键,任何环节的疏忽都会导致制片的失败 FAA固定液 制备：福尔马林5-冰醋酸5-70%酒精90 应用：半薄/石蜡切片 适用：一般固定根、茎、叶、花药、子房组 织切片。 补充说明： 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收缩；加入5%甘油可防固定液蒸发和材料变硬。 卡诺固定液 1 2 纯酒精 15ml 30ml 氯仿 5ml 冰醋酸 5ml 1ml 渗透迅速，固定根尖和花药只需30-60分钟，但固定时间不能太久，一般不超过一天 Leica RM2265旋转薄切片机 Leica RM2265旋转薄切片机制作半薄切片（厚度0.25-5μm）使用步骤： 1．接通电源，打开主开关 2．选择切片厚度 3．安放包埋块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定挟紧 4．安放粘有水槽的玻璃刀，并将玻璃刀口对准样品 5．选择切片模式（自动/手动）， 切片计数开始 6．取切片的材料：捞片，置于载玻片上，加热，脱树脂处理，对材料染色，着色后冲洗、封藏、烘干 半薄切片染色 常规染色方法有： 甲苯胺兰染色法、天青Ⅱ美兰染色法、碱性复红法、苏木素-伊红法、H．E染色法和Giemsa染色法等。 ❤无论哪种方法都需预先做处脱树脂处理，否则染料不宜渗入，影响染色效果。 脱树脂处理： 过程——将干燥切片插入氢氧化钾无水酒精饱和溶液l0～15 min后，无水酒精洗三次，经梯度酒精下行，水洗后染色。此过程即繁琐又费时，所以选择理想的染色剂非常重要。 染色方法 现 象 番红－固绿对染法 木质化的细胞壁及细胞核－红 纤维素的细胞壁及细胞壁－绿 铁矾苏木精法 细胞一般结构及细胞分裂时期的优良染剂，细胞分裂时期的染色体染成黑色 高碘酸－席夫反应法 （PAS法） 植物组织染成不同程度的红色，可将纤维素细胞壁及淀粉粒染成红色 细胞壁的染料 酸性品红 番红 固绿 甲苯胺蓝 苏木精 结晶紫 亮绿 苏丹IV 细胞核染料（碱性） 碱性品红 苏木精 洋红 番红 地衣红 结晶紫 细胞质染料（酸性） 酸性品红 甲苯胺蓝 曙红 固绿 苦味酸 各种荧光染料 染色原则：先用碱性染料染再用酸性染料染 ❤谢谢！