人用狂犬病疫苗Vero细胞制备标准操作规程.doc

目的：制定和规范Vero细胞制备的程序，保证生产用细胞质量。 范围：人用狂犬病疫苗生产用细胞的制备。 责任：细胞组全体人员对本规程实施负责。 程序： 1．材料 名称 规格 1.1MEM 6L/瓶 400ml/瓶 1.2精制小牛血清 400ml/瓶 1.33%谷氨酰胺 100ml/瓶 50ml/瓶 1.4庆大霉素溶液（1万单位/ml） 200ml/瓶 50ml/瓶 1.57.5%碳酸氢钠溶液 400ml/瓶 50ml/瓶 1.60.02%EDTA溶液 400ml/瓶 1.775%乙醇溶液 1.83%甲酚皂溶液 1.90.1%新洁尔灭溶液 1.100.85%生理盐水溶液 1.11注射用水（本室自制） 1.12二甲基亚砜 以上液体配制方法各自液体配制标准操作程序编号： 2．设备 2.1转瓶机 45瓶/台 2.24℃冰箱 1台 2.3-20℃组合式冰库 1个 2.437℃孵箱 1台 2.537℃恒温室 2.6不锈钢止血钳子 规格：20cm 16cm 2.7液氮罐 2.8不锈钢工作台 2.9不锈钢边台 2.10不锈钢双层车 2.11喷灯及管道 2.12不锈钢 大 小 2.13倒置显微镜 1台 2.14乙醇罐 2.15大不锈钢盒 2.16小不锈钢盒 2.17栓盒 2.18安瓶封口器 2.19不锈钢3．器具 3.1吸管 1 ml 2ml 5ml 10ml 3.2吸耳球 1ml 10ml 3.3250ml 瓶 3.4500ml 瓶 3.5100ml 瓶 3.6方瓶、 大方瓶 3.73L瓶 3.810L瓶 3.9安瓶 3.10分液管道 3.11中试管架 3.12青瓶 10ml 3.13废液缸 3.16方瓶不锈钢盒 4．辅助材料 4.1灭菌纱布 4.2硫酸纸 4.3绳 4.6无毛布 4.7胶布 4.8剪刀 4.9裁纸刀 4.10封口膜 4.11砂锯片 4.12二连管（球） 4.13记号笔 4.14方瓶架 4.15高压灭菌指示卡 4.16镊子 4.17脱脂棉 4.18细胞计数板 5．操作步骤 5.1生物反应器用细胞的制备（以制备900ml细胞悬液为例） 5.1.1细胞的复苏 5.1.1.1物品准备 5.1.1.1.14号栓、翻帽栓的准备 从干燥室取出20个4号栓，装入铺好无毛布的饭盒内，从干燥室取出20个翻帽栓，装入铺好无毛布的饭盒内放入高压灭菌指示卡，盖好无毛布及盒盖，绑好。使用前121℃60分钟高压灭菌处理。 5.1.1.1.21ml、5ml、10ml吸管的准备 从干燥室取出1ml吸管放入吸管筒，准备1筒；将5ml吸管放入吸管筒，准备2筒；将10ml吸管放入吸管筒，准备2筒。使用前180℃2小时干热灭菌处理。 5.1.1.1.3250ml盐水瓶、500ml盐水瓶、大方瓶的准备 取洁净干燥的10个250ml盐水瓶、10个500ml盐水瓶、10个大方瓶，用2层硫酸纸包住瓶口，用绳绑紧，放入铺好硫酸纸的不锈钢盒内，盖上硫酸纸及盒盖，绑好。使用前180℃2小时干热灭菌处理。 5.1.1.1.4细胞：为V134代细胞，数量1支由2人复核检查其名称，批号，代次，日期，检查合格后填写相关的领用记录方可使用。 5.1.1.2工作环境 5.1.1.2.1仪器、设备运行，物品准备情况、灭菌指示卡、生产区状态都符合规定. 5.1.1.2.2操作人员按《进出洁净区标准操作规程》进入万级洁净区，打开层流罩，净化30分钟。 5.1.1.3复苏液的配制 配方：MEM+20%