WprA基因在Bacillus subtilis WB800中的克隆表达.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2012, Vol.28, No.8 WprA 基因在Bacillus subtilis WB800 中的克隆表达 柴海云，崔堂兵 （华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006） 摘要：对源自Bacillus subtilis 168 的具有纤溶活性的基因序列（WprA）进行克隆，然后将WprA基因克隆到大肠杆菌-枯草杆菌 穿梭载体 pBE3 中，构建表达载体pBE- WprA，将重组载体转化到Bacillus subtilis WB800 中，实现了WprA基因在Bacillus subtilis WB800 中的表达。结果表明，WprA 基因在Bacillus subtilis WB800 中的对数生长期和平衡期均获得了表达，且产物被分泌到胞外。 关键字：Bacillus subtilis WB800 ；纤溶活性；WprA 基因；表达 文章篇号：1673-9078(2012)8-927-929 Clonging and Expression of a WprA gene in Bacillus subtilis WB800 CHAI Hai-yun, CUI Tang-bing (School of Biosciences and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006 , China) Abstract: A fibrinolytic enzyme gene ( WprA) was cloned from Bacillus subtilis 168. To efficiently express WprA in Bacillus subtilis WB800, WprA gene was inserted into pBE3 to yield a nove vector pBE-WprA. Then the vector pBE-WprA was transformed and expressed in Bacillus subtilis WB800. Results showed WprA gene was efficiently expressed during the exponential and stationary growth stages, and WprA was secreted into the medium. Key words :Bacillus subtilis WB800; fibrinolytic activity; WprAgene; expression 据世界卫生组织统计，每年全球因患心血管病导 大 Calgary 大学Wong Sui-Lam 教授惠赠；大肠杆菌 [1~3] 致死亡的人数达1750 万人 ，预计到2015 年，每年 -Bacillus subtilis 穿梭质粒 pBE3 由加州理工学院 因心血管疾病而死的人数将达到2000 万，死亡率还仍 Frances 教授惠赠。克隆宿主菌E.coli DH5a 为本实验 有上升趋势。因此血栓性疾病引起了医学界的高度重 室保存。 视和关注。治疗血栓性疾病的最广泛和有效的手段仍 1.1.2 试剂 是药物溶栓，鉴于此开发、研制预防和治疗血栓性疾 聚合酶premix LA Taq，DNA 标准分子质量1kb 病的药物就成了研究热点。 Marker，T4 DNA 连接酶，限制性内切酶EcoR