实验4 杀虫剂毒力测定.ppt

杀虫剂毒力测定 吴顺凡 农药科学系 杀虫剂毒理与害虫抗药性监测课题组 邮箱：wusf@njau.edu.cn；办公室：理科楼B828 2014-4-18 实验四 基本概念 杀虫剂的生物测定：是度量杀虫剂对昆虫及螨类产生效应大小的农药生物测定方法。广义的说，就是利用生物（昆虫、螨）对杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或化合物的生物活性的一种基本方法; 杀虫剂毒力测定主要内容：一是初步毒力测定，二是精密毒力测定; 初步毒力测定一般只判断药剂是否具有杀虫活性，不能确定化合物的毒力大小，也不能区分毒杀作用方式。 精密毒力测定是指在特定条件下衡量某种杀虫剂对某种昆虫毒力程度的一种作用方式。 测定方法的选择 不同的杀虫剂对不同种类的害虫毒力程度各异，致毒作用方式也不相同，所以测定方法也各不相同； 杀虫剂的作用方式主要有：触杀、胃毒、内吸、熏蒸、驱避、引诱、拒食生长发育调节等； 一般说来，一种试验方法往往只局限杀虫作用方式的一个方面，因此在测定的方法的选择上也应根据杀虫剂的作用方式进行设计。 主要内容 触杀毒力测定； 胃毒毒力测定； 熏蒸毒力测定； 内吸毒力测定。 触杀毒力测定 杀虫剂的触杀作用是使药剂经昆虫表皮、感觉器及爪垫进入体内而产生的毒杀作用。杀虫剂触杀作用测定时应尽量避免药剂经口、气门等途径进入体内。 由于目前使用的杀虫剂大多数具有较强的触杀作用，因此杀虫剂的触杀毒力测定应用非常普遍。 触杀毒力的大小通常以LD50 、 LC50或KT50表示。 测定方法可分为整体处理法和局部处理法，常用的有点滴法，浸液法、药膜法、喷雾法、喷粉法及铜丝圈法等。 点滴法：因其施药量比较准确，易于操作而运用最为普遍。但点滴法一般要求供试昆虫数量较多，另外点滴部位及每头虫体点滴药液的体积和点滴散布面积要求相同，否则有明显影响； 喷雾法与喷粉法最接近田间情况，但喷雾（粉）时的压力是影响药剂喷洒是否均匀的重要原因，此外有时还不能完全消除胃毒毒力的可能； 药膜法比较接近实际防治情况，操作方便。多用来比较触杀速率，常用来测定药剂的击倒作用。以击倒中时（KT50）即击倒50%供试昆虫所需时间（分钟）来表示或测定杀虫剂对虫体很小（如蓟马、赤眼蜂等）的昆虫的毒力； 浸液法最为简单，但易产生胃毒毒力，对水生昆虫如孑孓以及水蚤等较为适宜。 1. 点滴法（Topical application） 毛细管微量点滴器 构造示意图 点滴法是在每头虫体的一定部位，点滴一定浓度及一定量的药液，用毛细管微量点滴器进行，适用于体型较小的昆虫如鳞翅目幼虫、蚜虫等。 手动微量点滴仪/全自动微量点滴仪 毛细管微量点滴器 橡皮头 支撑和固定部分 毛细管 毛细管微量点滴器由毛细管和1mL移液枪枪头两个部分构成 毛细管为细钢管，内径约80微米，长0.5厘米。 1mL移液枪枪头将毛细管固定。在枪头的另一端配上顶端有小孔的橡皮头，作为压出或吹出药液之用，毛细管容积可用同位素稀释法或快速薄层扫描仪（CS-920）来测定，点滴的药量一般在百分之几微升。 点滴法实验步骤 预备试验：将配好的原药丙酮液，用毛细管微量点滴器点滴0.04微升药液于3龄棉铃虫幼虫胸部背面，每组处理2-3个浓度（参照已知同类杀虫剂，用丙酮配制低浓度和高浓度的药液，找出活虫组剂量和死虫组剂量）。 每浓度处理10头幼虫，经24～28小时（昆虫生长调节剂类药剂如虫酰肼所需时间还应长些）观察记载幼虫死、活情况。同时取50头昆虫点滴丙酮液作空白对照试验。 根据预备试验的结果，配制系列梯度浓度（等比系列）的药液，包括从最低浓度（活虫组的剂量）开始，到最高浓度（死亡组的剂量）止。 将标准测试幼虫挑入具半人工饲料的培养皿（直径为5cm）中，每皿5或6头 药剂用丙酮配制成等比系列浓度 用0.04µl毛细管点滴器将药液滴于幼虫胸部背面 点滴法操作 每浓度点10头，重复3次，共30头，以丙酮为对照，处理幼虫 饲养条件：温度27±1℃，光照周期16∶8 (L∶D) h。 点滴法操作 处理后幼虫单独饲养，分别记录处理剂量，根据处理剂量和毛细管点滴器的体积计算出每头幼虫的受药量(微克/头)。（字幕 配音、放置培养箱视频） 整理试验结果，算出该药剂对供试昆虫的致死中量（LD50）。 数据计量与分析 （二）喷雾法和喷粉法 用Potter喷雾塔直接对昆虫喷洒也是常用的触杀毒力测定方法。 药液管 1 通气管 2 药液管 载物台 Potter喷雾塔构造 Potter喷雾塔是一个文氏管（Venturi tube）形的筒，即两端大中间细，雾点是直接往下喷的 。喷筒采用文氏管形是为了沉降雾点的压力一致，使喷洒物表面沉积的药液量更为均匀，喷筒下面有一个平台，可放被喷洒物，此平台可上下调节，使喷筒下沿与平台间保持适当的距离（距离过大，液滴大部分四散；距离过小，造成返回气流