工业微生物接种技术.ppt

⑤厌氧手套箱：严格厌氧条件 箱内始终充满成分为N2：CO2：H2＝85：5：10（V/V）的气体，并有钯催化剂保证箱内处于高度无氧状态。通过塑料手套进行操作，外界物体进出通过交换室。 （二）实验室液体培养 液体培养法： 好氧菌：确保培养液中含有较高的溶解氧浓度是关键。 试管液体培养； 三角瓶浅层液体培养：仅适用于兼性厌氧菌 摇瓶培养：又称振荡培养； 台式发酵罐：几升至几十升，使用方便 厌氧菌： 放入厌氧罐或厌氧手套箱中； 培养基中加入巯基乙酸、半胱氨酸等有机还原剂。 一般情况下（1.013×105 Pa，20℃），氧在水中的溶解度仅为6.2 mL／L（0.28 mmol／L），这些氧只能保证氧化8.3 mg（即0.046 mmol／L）葡萄糖，仅相当培养基中常用葡萄糖浓度的1‰。 氧的供应是好氧菌生长、繁殖中的限制因子。 提高溶氧速率的具体措施： ① 浅层液体静止培养； ② 利用往复式或旋转式摇床作摇瓶培养； ③ 在发酵罐的底部通入加压空气，并用气体分布器使其产生均匀、密集的微小气泡； ④ 对培养液进行机械搅拌，并在发酵罐的壁上设置阻挡装置等。 厌氧罐或厌氧手套箱 液体培养厌氧菌 不必提供额外的培养措施 单独放在有氧环境下培养 有机还原剂 加入能显著降低氧化还原电位的铁丝等 巯基乙酸、半胱氨酸、维生素C或疱肉等 加入 无机还原剂 用深层培养或同时在液面上封一层石蜡油或凡士林-石蜡油 台式发酵罐 实验室培养法 固体培养法 好氧菌的固体培养 好氧菌的液体培养 厌氧菌的固体培养 厌氧菌的液体培养 液体培养法 试管斜面 培养皿琼脂平板 克氏扁瓶 茄子瓶 高层琼脂柱 厌氧培养皿 厌氧罐 亨盖特滚管技术 厌氧手套箱 试管液体培养 三角瓶浅层液体培养 摇瓶培养 台式发酵罐 严格厌氧 二、微生物工业培养法 （一）工业固态培养法： 好氧菌：曲法培养。依制曲容器的形状和规模分为：瓶曲、袋曲、盘曲、帘子曲、转鼓曲、通风曲等。——酱油酿造 厌氧菌：堆积培养法。 ——白酒生产 曲 根据制曲的容器形状和规模的大小分类 瓶曲 袋曲（用塑料袋制曲） 盘曲（用木盘制曲） 帘子曲（用竹帘子制曲） 转鼓曲（用大型木质空心转鼓横向转动制曲） 通风曲（厚层制曲） 机械化程度和生产效率较高的现代化制曲技术，酱油酿造业广泛使用。 食用菌制种和培养 小曲 红曲 挂曲 （二） 工业液体培养法 液体培养法： 好氧菌： 浅盘培养：早期青霉素与柠檬酸发酵； 深层液体通气培养：大型发酵罐+搅拌。 ——糖化酶生产 厌氧菌： 液体静止培养法：液体培养基置于发酵罐中，不通气，不搅拌，静置保温培养，简化了工艺，节约了能源。 ——啤酒生产 大型发酵罐 穿刺接种方法： （1）消毒 （2）标记 （3）整理台面 （4）点燃酒精灯 （5）接种 1）手持试管 2）旋松棉塞 3）接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌 4）拔出棉塞 5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 6）穿刺：水平法和垂直法。 将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基， 至接近试管底部，然后沿接种线拔出 7）塞上棉塞 8）接种针灼烧灭菌 （1）划线接种 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 4.平板接种 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 ※适用于含菌量较多的标本 连续划线法 ※适用于含菌量较少的标本 稀释法：微生物分离、纯化 稀释倒平板法:菌悬液稀释—不同梯度的稀释液少许与培养基混合—摇匀—倒培养皿中 稀释混合平板法（倾注法）：稀释—培养皿中加入不同梯度的菌悬液1mL—加45℃左右的培养基—摇匀 稀释涂布平板法：倒平板----稀释----接种0.1mL—涂布 各种接种方法的用途 1.斜面接种法 用于鉴定和保存菌种。 2.液体培养基接种法 可观察细菌在培养基中的生长现象或用作生化反应实验 3.半固体培养基接种法 穿刺接种法，用于保存菌种或观察细菌动力 　4.平板划线接种法 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。 5.涂布接种法：用于分离、测定标本中活菌数和药敏实验细菌接种 6.倾注培养法：用于活细菌计数。 是将需要的某种微生物从混杂的微生 物群体中分离出来，得到只含有一种 微生物的培养物。 是由一个单细胞或一种细