不同持续时间低氧后运动对大鼠骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的影响.pdf

不同持续时间低氧后运动对大鼠骨骼肌组织HIF-1α 蛋白表达的影响1 * 刘铭，瞿树林 ，汤长发 湖南师范大学，长沙 (410006) E-mail ：lmcs32@163.com 摘 要：目的：探讨不同持续时间低氧后运动对大鼠骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的影响。 方法：训练完后，将SD 大鼠放入低氧仓中，将氧浓度控制为12.5% （相当于4000m 海拔高 度），分别在8h 和12h 后，将8h 低氧组和 12h 低氧组动物取出。低氧刺激每天一次，每周 5 天，共持续4 周。运用免疫组化方法检测大鼠骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达。结果与结论： HIF-1α在低氧训练刺激下表达上调，HIF-1α蛋白表达随着低氧刺激的时间延长而减少。 关键词：不同持续时间，低氧训练，骨骼肌，HIF-1α HIF-1 是今年发现的能够提高缺氧耐受性的核蛋白[1]，由HIF-1α和HIF-1β亚单位组成， 分子量分别为120kD 和91-94kD[2] 。HIF-1α是在特定缺氧条件下广泛存在于人类和哺乳动物 的一种缺氧应答调控因子。在缺氧条件下，HIF-1α迅速增加，并与HIF-1β结合形成二聚体， 能激活很多缺氧反应性基因，并与相应的靶基因相结合，通过转录及转录后的调控，使机体 [3，4] 对缺氧、缺血产生适应反应 。 在一定强度的运动中，机体的组织和细胞处于一种相对缺血和缺氧的状态，肌肉细胞内 氧分压降到很低水平时，在骨骼肌组织中也能检测到HIF-1α的高表达。再加之低氧的刺激， 低氧训练对骨骼肌HIF-1α的表达会产生何种影响，骨骼肌HIF-1α的表达与不同低氧训练刺 激时间和方式的关系如何，有必要进行深入研究和探讨。 1. 实验材料与方法 1. 1 动物分组 健康雄性的8 周龄Spragne-Dawley 大鼠，体重180～220g ，共30 只，常规分笼、以国 家标准啮齿类动物饲料饲养（大鼠及喂养的饲料均购于湖南农业大学实验动物学部）。实验 条件：自由饮水进食。室温22±3 ℃，相对湿度50%，光照时间15 小时。正式实验前一天称 重，按体重分层随机分为 3 组，运动对照组、低氧 8h 运动组和低氧 12h 运动组，每组 10 只。 1. 2 模型制备 本实验采用零坡度跑台的训练方式，以25m/min 的速度训练，每天1h。训练完后，将 实验组的20 只大鼠放入由Hypoxico 公司的生产的低氧仓中，并用TOXIRAE PGM-36 型氧 气监测仪实时监测低氧舱中氧含量的变化，将氧浓度控制为 12.5% （相当于4000m 海拔高 度），过 8h 和 12h 后，分别将低氧 8h 训练组和低氧 12h 训练组取出。低氧训练共持续4 周，每周5 天。 1. 3 取材 实验结束24h后，采用由军事医学科学院军事兽医研究所提供的速眠新Ⅱ（0.8-1.2ml/Kg ） 腹腔注射，麻醉至理想即断头处死，取出大鼠比目鱼肌，置入4 ％多聚甲醛中固定，24小时 1本课题得到湖南省自然科学基金（05JJ30066 ）和湖南省教育厅课题（05C399 ）资助。 - 1 - 后常规石蜡包埋待进行组织免疫化学指标的测定。 1. 4 主要试剂 HIF-1α兔抗大鼠抗体，购自美国Santa Cruz Biotechnology公司，PV试剂盒和DAB显色剂， 购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1. 5 免疫组化染色 采用免疫组织化学法检测比目鱼肌组织中HIF-1α的蛋白表达。将所取组织块切厚为 5µm 的切片；脱腊、水化组织切片；3 ％H2O2 孵育10min；高压锅抗原修复后室温冷却；滴 加1:50 的一抗，4 ℃冰箱过夜；滴加二抗，37℃孵育30min ；DAB 染色；自来水冲洗；苏木 素复染；自来水冲洗；盐酸酒精分色；中性树脂