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利用Tn51063转座诱变法分离苜蓿中华根瘤菌042BMnoeB基因的研究
卷 期
!! 微 生 物 学 报 $% ’!! ,% ’
年 月
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利用!#$%’( 转座诱变法分离苜蓿中华根瘤菌
)*+, -(./ 基因的研究
杜秉海 李小红 林榕姗 王 磊 杨苏声
（中国农业大学生物学院微生物学系 农业部农业微生物资源及其应用重点开放实验室 北京 0###-! ）
摘 要：采用三亲本杂交方法将带有 （含 ）的质粒 导入苜蓿中华根瘤菌（
7@460#8/ !#$% )IJ0#8/; ’()*+’,)-’.
） ，进行转座子插入诱变，在含有氯霉素、卡那霉素的 平板上筛选接合子。通过结瘤试验，从 个
./!’!)0’ #!2K 7L 0###
突变株中，筛选到 个结瘤突变株 、 和 。它们都表现出发光酶活性，表明转座子正向
/ #!2KI4 #!2KI00 #!2IK-
插入到基因组中的某个启动子下游。M%FNC9*@ 杂交结果证实，转座子均为单一位点插入。对#!2KI4 突变株基因
组进行反向O1I，扩增位于7@460#8/ 两端的侧翼序列。测序结果表明，转座子插入到苜蓿中华根瘤菌的共生质粒
)M?( ()/% 基因内。根据基因组中()/% 上游和下游序列扩增出#!2K ()/% ，其与苜蓿中华根瘤菌0#0 ()/% 的同
源性为 ，而与 蛋白的氨基酸序列相似性为 。疏水性分析发现， 是一个跨膜蛋白，在 末端有
-3P ,%92 -4 P ,%92 , !
个跨膜区，其中包含 个初级螺旋和 个次级螺旋。
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关键词： ，结瘤基因，发光酶活性，
’()*+’,)-’. ./!’!)0’ 7@460#8/
中图分类号： 文献标识码： 文章编号 （ ）
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根瘤菌与豆科植物之间的共生作用是由植物和 原（ ）。 的生物合成由 、 基因所控
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根瘤菌多个基因所决定的，是一个十分复杂的生物 制，而 的生物合成由 基因所控制，它们均
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