367916--液相色谱使用技术--307408601.pdfVIP

液相色谱实用技术液相色谱实用技术(一一) 液相色谱实用技术液相色谱实用技术 一一 HPLC定量原理及方法 液相色谱定量分析的基本原理液相色谱定量分析的基本原理 液相色谱定量分析的基本原理液相色谱定量分析的基本原理 ❀ 在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物 ❀ 液相色谱定量是相对定量的方法 : 即由已知量的纯被测物标样推算混合物中被测物的量 ❀ 液相色谱法定量的依据是 : ✎ 被测组分的量与响应值 (峰高或峰面积)成正比 ✎ 由已知量的标样可求得定量校正因子 ✎ 定量校正因子 :是定量计算公式中的比例常数,其物理 意义是单位响应值 (峰面积)所代表的被测组分的量 ✎ 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得 其含量 液相色谱定量分析的基本步骤液相色谱定量分析的基本步骤 液相色谱定量分析的基本步骤液相色谱定量分析的基本步骤 ❀ 开发一个适合定量分析的色谱方法: 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5 确定被测组分色谱峰的一致性 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围 ❀ 用不同浓度的标准样品建立校正曲线 ❀ 考查定量方法的准确度及精密度 ❀ 用M32色谱管理系统实施样品采集,数据处 理及报告结果 鉴别需定量的色谱峰鉴别需定量的色谱峰(定性定性) 鉴别需定量的色谱峰鉴别需定量的色谱峰 定性定性 ❀ 定性鉴别每个要定量的色谱峰 ✎通过比较保留值(通常是保留时间)的方法,找 到各色谱峰所对应的组份 ✎大多数情况下用与标样比较保留时间来定性 ❀ 即所谓： ➀ 保留时间相同，可能可能是同样的组份 可能可能 ➁ 保留时间不同，肯定肯定不是同样的组份 肯定肯定 用保留时间定性用保留时间定性 用保留时间定性用保留时间定性 ❀ 用“标样”的保留值定出被测组份的位置 0.40 0.35 Ethylparaben 0.30 Propylparaben 0.25 AU 0.20 Uracil 0.15 0.10 0.05 0.00 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 Minutes 进一步的确认进一步的确认(定性定性) 进一步的确认进一步的确认 定性定性 ❀ 标准加入 ❀ 同时用其他方法 ✎其他色谱方法（改变机理，如：