9_霍乱弧菌样品采集和前处理.ppt

* * 霍乱弧菌样品采集及前处理 2012.9.20 长沙 内 容 样品采集的总体要求 样品种类 采样方法及其注意事项 样品前处理 增加或改动内容 两种新的水样采集方法 Moore法（小体积水样）及Spira法（大体积水样） 水样的前处理方法 杂质少的水体、浑浊水体、海洋和河口水样 食品的前处理方法 贝类、鱼类、牡蛎 样品采集的总体要求 应由受过专门培训的人员来执行 按照生物安全防护的要求进行操作 样品的唯一性标识及其相关信息要完整 送检箱每次用后须经消毒处理 样品种类 粪便 病人呕吐物 尸体肠内容物 粪便污染的衣物及相关物体表面如地面 水体 食品 水生动物 苍蝇 采样方法 一、 粪便标本 一般采用自然留便，若采样时病人无便或婴幼儿则可采用肛拭法。尽可能在急性期、抗生素使用前采集新鲜粪便，样品采集后应尽快送检。 留便：取自然排出的新鲜粪便，成形便采集约5g标本；水样便或典型的米泔水样便采集约5ml。 肛拭法：先用无菌甘油水或生理盐水湿润棉签，多余的液体紧靠管壁挤出；再用棉拭或肛门采便管由肛门插入直肠内约3cm～5cm（幼儿约2cm～3cm）处，轻轻旋转360°，擦取直肠表面黏液后取出。避免采便量过少（注意棉签上应沾有粪便）。 采样方法 一、 粪便标本 采肛拭子时应注意拭子大小是否适宜、光滑、结实且不易脱落。 肛拭子标本如不能在2h内送达实验室，应插入Cary-Blair运送培养基运送，注意培养基应埋住粪便拭子，手接触的部分在管口折断弃去。 采样方法 一、粪便标本 粪便标本如果运送时间不超过24h，还可将其放在碱性蛋白胨水中室温运送。 标本与碱性蛋白胨水的比例为8mL～10mL碱性蛋白胨水可加入1mL～3mL液体便或指甲大小的成形便。过多的粪便量会降低保存液的pH值。 如果没有合适采便器材以及没有运送培养基时，可用无菌吸水纸条浸于液体粪便中，然后将吸水纸条密封于塑料袋中，放入冷藏箱中运往实验室。 采样方法 二、 呕吐物和洗胃水 患者如有呕吐，应尽量采集呕吐物。 用无菌压舌板或棉拭子挑取少量呕吐物作为检材，放入自封塑料袋中并封好袋口或置于灭菌带盖瓶中，然后盖紧瓶盖，立即置于冷藏箱中。 洗胃水置于灭菌容器内冷藏送检 采样方法 三、物体表面 用灭菌棉拭蘸以灭菌生理水或碱性蛋白胨水涂擦被粪便污染的衣物、床单、食物操作台、砧板、地面等相关物体或怀疑污染物体表面，放入到装有少量生理盐水的采样管中，立即冷藏；或直接置于碱性蛋白胨水管中，常温下运往实验室。 采样方法 四、水体标本 包括河口水、江河水、沟渠水、池塘水、湖水、井水、港湾海水、乡镇自来水厂源水、医院污水排放口、下水道排放口、海水产品养殖水、海水产品交易市场的出水口等。需要时也可采集水体的底泥作为检材。 水样标本的采集方法有多种，各实验室应根据现场流行病学调查需要及实验室自身检测条件，如有无过滤器等等，作相应的选择。 水源标本的采集方法 1. 盐水瓶法： 以灭菌的500ml盐水瓶采取水样至少450ml，但不能让水样充满整个瓶子，应留有一定的空气。一般在可疑污染的河流、池塘岸边的30cm深度以内的表层水采取水样。连续采取多份水样时，注意防止水样间相互污染。采取的水样应立即放入冷藏箱中尽快送到实验室。不能在3小时内送检者，应在采水点即将水样加入培养基中，摇匀，室温下运送至实验室。 水源标本的采集方法 2. Moore纱布集菌法： 该方法尤其适用于河流等流动水水样的采集，但对于静止水无优势。城市生活污水的采集也可采用此法，该技术的敏感性似乎不取决于污染源与采样点的距离，应将采样装置放在各主要管道输入口处。 Moore纱布集菌法 取120cm×15cm纱布块（图-1），沿纱布长度方向折叠几次，在中心系一钓鱼绳(长1m以上)，为防止绳子被固定在树枝或其它物体上时被磨断，可以在绳子的末端系上一段金属细丝（图-1）。用牛皮纸包好，高压蒸汽灭菌备用。采样时，将纱布放在采水点的水中，然后将金属丝固定于岸边的树枝或其他物体上，放置24～48小时后，将带着水(约55ml)的纱布放入灭菌瓶中，置于冷藏箱后送到实验室。 水源标本的采集方法 2. Moore纱布集菌法： 如果是采集医院污水排放口、下水道排放口、肉联厂加工的出厂水等水样时，应将纱布放在各个污水管道系统入口处，并仔细评估采样点周围可能抑制目标菌分离培养的各种因素。 对于有倾倒腐败垃圾的污水系统进行采样时，应将纱布放在倾倒口的上游，以免有毒废弃物的污染，影响后续的病原体分离。水样采集后不能在3小时内送检者，应在采水点即将带水纱布加至增菌液中，摇匀，室温下运送至实验室。带水纱布与增菌液的体积之比应为10%～20%。 Spira 纱布集菌法 水源标本的采集方法 3. Spira 纱布集菌法：