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生物素化酶 生物素化抗体 亲和素—生物素 —酶复合物 生物素 亲和素 生物素与抗体共价偶联后加入与过氧化物酶（或荧光素）结合的亲和素 利用生物素－亲和素之间的结合，间接显示组织细胞中的抗原 标记亲和素生物素法 利用亲和素为桥梁 连接生物素化的抗 体和生物素化的酶 桥式亲和素－生物素法 亲和素－生物素 - 酶复合物技术 亲和素与生物素偶联的过氧化物酶组合成亲和素－生物素－酶复合物 ①特异性抗体（一抗）先与组织细胞中的抗原结合， ②生物素化抗体（二抗）再与一抗结合 ③复合物与生物素化抗体结合 ① → ③ → ②→ 葡萄球菌A蛋 (Staphylocal protein A, SPA) ◆ 是金黄色葡萄球菌细胞壁含有的一种蛋白 简称为A蛋白或蛋白A ◆ SPA能与人及多种哺乳动物血清中IgG呈 非特异性结合又能与标记物结合 经标记的SPA可代替相应标记的二抗 2. 葡萄球菌A蛋白与IgG系统 亲和素 （四） 免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以光镜和电镜下都可见的胶体金作为抗体或Ａ蛋白的标记物，间接显示组织细胞中特异分子的技术 胶体金颗粒大小一般在5--60nm 胶体金颗粒表面带负电荷，蛋白质表面带正电荷，蛋白质在等电点或偏碱时被吸附于金颗粒表面,形成一个蛋白层阻止了金颗粒的相互接触，使免疫金处于稳定状态 胶体金对蛋白质的标记: 胶体金 A蛋白 1. 免疫金法※ (Immunogold staining IGS) 2. 免疫金银法 （Immunogold silver staining, IGSS) 3. 彩色免疫金银法 （Coloured IGSS, CIGSS） 免疫胶体金技术常用方法 *( * 第六章 免疫细胞化学技术（免疫组化） ( immunocytochemistry ) 是利用免疫反应来定位组织和 细胞中特异大分子的一类技术 第一节 免疫细胞化学原理 ★ 第二节 免疫细胞化学方法 免疫细胞化学技术 一、免疫反应的特异性 二、免疫细胞化学反应 三、抗原 四、抗体 五、标记物及其在光镜和电镜下可见性 第一节 免疫细胞化学原理 免疫反应的特异性表现在： 抗原作为一类结构复杂的大分子能刺激机体 产生对其特异的抗体并与抗体发生反应 抗体针对某种抗原分子而产生的，特异地识 别该抗原并与其结合 一、免疫反应的特异性 免疫细胞化学反应的原理： 把组织细胞中的特异分 子作为抗原,用在显微镜下可 见的标记物标记特异抗体(或 者标记抗原抗体复合物)使特 异的免疫化学反应具有可见 性,从而间接地显示抗原,达 到在细胞或细胞器水平定位 特异分子的目的 二、免疫细胞化学反应 组织抗原 抗体 标记物 标记抗体 1 荧光 2 酶 3 亲和技术 4 金标 抗原 免疫细胞化学反应过程为： ＋ 标记物 间接法 直接法 两种免疫反应方法 抗 原： 凡能刺激机体产生抗体并能与 抗体特异结合的物质称为抗原 抗原性： 物质所具有的这种特性称为抗原性 三、抗原 细胞中具有抗原性的化学成分有： 蛋白质 多肽 脂蛋白 多糖 脂多糖 糖蛋白 核蛋白 这些生物大分子都能用免疫细胞化学技术检测吗? 从生物学功能来看都包括了哪些物质? 酶、 受体、 抗体、 细胞外基质 激素、 细胞结构蛋