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The Peptide Quality Standard The Peptide Quality Standard 多肽切割简介 切割流程图 准备工作 切割液的选择 切割液的配制 仪器设备的调试 加入切割液并于摇床震荡 抽滤并收集滤液 沉淀、离心、洗涤 得粗品肽抽干送QC 切割前准备工作 文件和树脂一一对应检查 树脂称重 切割液配制 切割液低温储存:(-20℃) ⒈E液不得超过一周 ⒉F液不得超过一个月 切割液的选择 根据肽的序列上氨基酸的不同，选用不同的切割液，除去肽链上氨基酸的保护基团。 含有Trp，Met或Cys(Trt) YES NO E液 F液 切割液的配比 E液：TFA:茴香硫醚:苯酚:EDT:水 =87.5:5:2.5:2.5:2.5 F液：TFA:TIS:水=95:2.5:2.5 *注：苯酚的体积是指在熔点下熔融的体积，其他液体为常温下的体积。 还原切割液：10ml的E液加100-200mg的NH4I,0.5ml的DMS,摇匀，静置，用上清液！ 切割液用量 一般按10-15ml/g 树脂加入切割液。 如0.2mmol的合成量，树脂的取代度为0.5左右，这样合成前空白树脂重为0.4克，加上合成后由肽链引起的增重(15肽)，树脂大约0.7g，因此，需要加入大约8ml切割液。 切割时间 切割时间：是指向树脂中加入切割液开始，到用乙醚沉淀滤液为止这段时间。 大部分linker用TFA处理2.5h已经足够，但是要完全去除一些侧链保护基团则须要延长一些时间。 切割时间对肽链的影响：切割时间太长，肽链容易断裂，粗品中的产品含量就少；切割时间太短，树脂上的肽链没能完全切下来，或者肽链上氨基酸侧链保护基团不能完全除去。对于30个以上的肽来说，适当延长时间。对于切割不完全的树脂和粗品肽可依据已得粗品的质量、色谱和质谱，考虑重切。 减压过滤 用切割液将附着在切割管上的树脂洗下来，收集滤液。 *注意：标签号码对应。包括树脂切割管、切割液收集管和砂心漏斗上的标签号码一一对应。 沉淀、离心、洗涤 根据大多数肽在非溶剂中不溶的特性及温度越低，溶解度越低的性质，我们用冷乙醚来沉淀溶解在切割液中的多肽。 操作时应注意： 1）、看收集管中滤液的量。一般少于15ml的， 用一个离心管离心即可；多于15ml的要用两个离心管，以洗涤完全。 2）、边倒边用乙醚冲，使在乙醚中析出的肽尽量分散。如出现结块、抱团等现象，应用干净的玻璃棒将其打散。 如用玻璃棒还不能将其打散或粘在玻璃棒上，则需将其用TFA溶解后再用乙醚沉淀。 3）、离心时，离心机的转速为3500Rad/Min， 离心时间为2min，确保肽能完全沉淀下来。 4) 如序列为短肽或者序列中疏水性氨基酸较多,用乙醚沉淀时需加入一定量的石油醚,再离心。如还不能沉淀下来，则需将上清液旋蒸。 The Peptide Quality Standard The Peptide Quality Standard