JAK／STAT途径活化与白血病细胞增殖之间的关系.pdfVIP

· 208 · 广东医学 2016年 1月 第37卷第 2期 GuangdongMedicalJournalJan．2016，Vo1．37，No．2 JAK／STAT途径活化与 白血病细胞增殖之间的 关系 刘金梅 开滦总医院血液科 (河北唐山063000) 【摘要】 目的 探讨JAK／STAT途径活化与白血病HL一60细胞增殖的相关性。方法 分别利用二烯丙基 二硫 (OADS)、ATRA、AG490处理体外培养的HL一60细胞，检测给药前后抗原CD11b分化能力、NBT还原能力； Westernblot法检测_IAK／sTAT家族中与DADS诱导增殖相关的蛋白表达情况；免疫组化法检测转录因子e—jlln、 c—los、c—myc、STAT的蛋白表达水平。结果 DADS可显著提高HL一60细胞分化能力；随着DADS浓度增加， NBT还原能力下降，且低于ATRA、AC,490处理组；经不同浓度 DADS处理，HL一60细胞 中JAK／STAT家族成员 JAK1／sTAT3磷酸化水平随DADS浓度升高而降低；经免疫组化分析显示，STAT3、c～myc的蛋白水平受DADS抑 制，而c—fos、c—jlln的蛋白则可受DADS作用表达升高。结论 DADS通过激活JAK／STAT信号通路抑制白血病 HL一60细胞增殖。 【关键词】 JAK／STAT；白血病；HL一60细胞；二烯丙基二硫；增殖 目前对肿瘤治疗的研究以对肿瘤细胞进行诱导分 1．25me,／LDADS组、2．5mg／LDADS组、5．0mg／LDADS 化为主要方向，通过药物对作用靶点实施诱导分化，使 组、10 mol／LATRA组，整个试验需重复进行3次。 信号通路当中相应蛋 白激酶活性发生改变，进而对参 1．3 形态学观察 各组悬液经96h处理后 ，于 1000 与细胞分化的核转录基因进行调控，最终抑制细胞 的 r／rain离心5rain后涂片，经WrightGiemsa染色于油镜 DNA合成，诱导分化 、减少增殖 。文献 报道 ，二烯 下对细胞形态的改变情况进行观察，分类细胞并计数， 丙基二硫(DADS)能够降低组蛋白的去乙酰化水平，促 200个／片，并对细胞的诱导分化率进行计算：(200一早 进白血病细胞诱导分化为红细胞。相关研究指 出， 幼粒细胞数一原粒细胞数)／200=诱导分化率 (％) DADS对细胞外信号调节激酶可产生抑制作用，从而 1．4 NBT实验检测还原能力 细胞浓度为 1×10并 使p38激酶的活性增强，诱导MGC803人胃癌细胞分 接种于培养板 (96孔)中，每孔 200IxL，同时加入各浓 化 。2014年 1 月，本研究探讨 DADS与 JAK／ 度诱导剂，将等体积溶剂加入对照组孔内，另设一空白 STAT途径活化及白血病 HL一60细胞增殖分化的相 对照组。经24、48、72、96h各时点培养后，1000r／rain 关性，旨在为临床靶向治疗提供实践基础和理论依据。 进行5rain离心后收集细胞，悬浮在每孔 200 L溶液 1 材料与方法 (0．24g／L，NBT～TPA)，培养板置于 0．05体积分数 1．1 主要 试 剂 DADS 由Fluka公 司提供 ，Mr= 37℃培养箱 (CO：)培养 1h，在细胞离心后将上清液去 146．28，d420=1．0，含体积分数为0．10～0．20、质量分 除，于每孔加入DMSO200IxL，并在室温下进行20rain 数为0．80的二烯丙基硫醚。将 Tween80与 DADS按 振荡，对波长570nm下吸光度值进行测量。 照2：1比例进行充分溶解，之后加入生理盐水(体积分 1．5 Westernblot分析蛋白表达情况 饥饿2h，离心收 数 =0．90)混匀振荡，进行 100倍稀释，作母液于 集AC~90、ATRA、DADS(1．25mg／L)处理3d后的细胞， 一 20℃环境留存，待制作各浓度稀释液。硝基 四氮唑 以冰PBS洗2次，细胞浓度 1×10。·L～，加入 50～100 蓝 (NBT)、佛波酯 (TPA)、全反式维 甲酸 (ATRA)均从