JNK-Sp1通路对H1650细胞增殖的影响.pdfVIP

广东医学 2016年7月第 ，；7卷第 l4期 GuangdongMedicalJournalJu1．2016，Vo1．37，No．14 · 2069 · 扶正抗癌方通过 SAPK／JNK—Spl通路对 H1650 细胞增殖 的影响术 李龙妹 ，杨小兵 ，：昊万垠 广州中医药大学第二临床医学院(广州510006)；广东省中医院芳村分院肿瘤科(广州510370) 【摘要】 目的 探讨扶正抗癌方抑制H1650细胞增殖的分子机制。方法 MTT活力检测法观察扶正抗癌方 对H1650细胞增殖的影响；蛋白质印迹法检测扶正抗癌方对P—SAPK／JNK、SAPK／JNK和Sp1蛋白表达的影响， 并加入SP600125(SAPK／JNK抑制剂)后检测扶正抗癌方对Spl表达的影响；MTr活力检测法观察抑制 SAPK／ JNK后扶正抗癌方对H1650细胞增殖的影响。结果 扶正抗癌方 以浓度和时间依赖性抑制H1650细胞的增殖 (P0．05)；扶正抗癌方以时间依赖性上调P—SAPK／JNK和SAPK／JNK蛋白的表达 (P0．05)，以浓度依赖性下调 Spl蛋白的表达(P0．05：；抑制SAPK／JNK逆转了扶正抗癌方对Spl蛋 白表达的下调和对H1650细胞增殖的抑制 作用(P0．05)。结论 扶正抗癌方可通过介导SAPK／JNK通路抑制Spl蛋白的表达，进而抑制Hl650细胞的增殖。 【关键词】 扶正抗癌方；增殖；SAPK／JNK；Spl 扶正抗癌方为广东省中医院肿瘤科吴万垠主任总 压制粒后分装至成品。每剂分2袋装 ，每袋 15g，1g= 结十余年的经验方。该方根据肺癌证型，从整体出发， l0．33g生药，质量按2010版药典颗粒剂项下常规项 辨证与辨病相结合、扶正与祛邪相结合，在治疗晚期非 目检验控制。以上颗粒制备由广东一方制药有限公司 小细胞肺癌 (non—smallcelllungcancer，NSCLC)中取 完成 (国家GMP认证)。 得了显著疗效。临床研究发现 ，与吉非替尼治疗晚期 1．1．3 主要试剂 RPMI1640培养基、胎牛血清、胰 NSCLC相比，扶正抗癌方联合吉非替尼显著延长 了患 酶(Gibco公司)；prestainedproteinladder、BCA蛋 白检 者的生存时间，提高了患者 的生活质量 。基础研 测试剂盒 、5×loadingbuffer(Thermo公司)；发光液、im— 究发现 ，两者联合对 H1650裸 鼠移植瘤具有抑制作 mobilon—ptransfermembrance(Millipore公司)；RIPA 用 ，且能抑制A549细胞 的增殖及凋亡 。c—Jun Buffer(10 ×)、SAPK／JNK (56G8)RabbitmAb、 氨基末端激酶 (JNK)／应激活化蛋白激酶 (SAPK)、特 SP600125、Spl(IMC3)RabbitmAb、Phospho—SAPK／ 异性蛋 白(Sp1)与肿瘤细胞 的增殖密切相关 ，因此 JNK (Thr183／Tyr185) (81E11)RabbitmAb(CST公 2015年6—12月，本研究以人肺腺癌 H1650细胞株为 司)；磷酸盐缓冲液 (HyClone公司)；GOATXRabbit— 研究对象 ，观察扶正抗癌方对两者表达的影响，探讨扶 HRR(BIO—RAD公司)；MI]r粉(MP公司)。 正抗癌方抑制 H1650细胞增殖的分子机制。 1．1．4 主要仪器 全 自动细胞计数仪 (Inno—Alliance 1 材料与方法 Biotech公司)；多微孔板振荡器 (IKA公司)；离心机 (京立离心机有 限公司)；多功能酶标仪 (BioTek公 1．1 材料 司)；冷冻离心机 (Eppendoff公司)；脱色摇床 (其林贝 1．1．1 细胞株 肺腺癌细胞株 H1650购 自上海生命科 尔仪器制造有限公司)；化学发光成像系统、半干转膜