Klotho蛋白对高糖作用下人脐静脉血管内皮细胞凋亡和衰老的作用.pdfVIP

广东医学 2015年8月第 36卷第 15期 GuangdongMedicalJournalAug．2015，Vo1．36，No．15 · 2323 · Klotho蛋白对高糖作用下人脐静脉血管内皮细胞 凋亡和衰老的作用 ：l： 张军 ，代文静 ，周敬群 ，张家俊 ，曹志刚 三峡大学仁和医院 ICU科，心血管内科 (湖北宜昌443000) 【摘要】 目的 研究抗衰老Klotho蛋白对高糖作用下人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡和衰老的抑制 作用及其机制。方法 培养HUVECs细胞，设置c组(加同体积PBS培养基)、L组(加含低浓度5．5mmol／L葡萄 糖组培养基)、H组(加合高浓度 33．3mmol／L葡萄糖组培养基)、K1组(加含0．1~mol／LKlotho+33．3mmol／L葡 萄糖组培养基)、K2组(加含 1ixmol／LKlotho+33．3mmol／L葡萄糖组培养基)、K3组(加含 10~mol／LKlotho+ 33．3mmoL／L葡萄糖组培养基)，分别处理48h。SA—B一半乳糖苷酶染色法检测各组HUVECs细胞衰老情况； RT—PCR方法检测各组 HUVECs中人端粒酶逆转录酶mRNA的表达情况；流式细胞术检测各组HUVECs的细胞 凋亡率；Western—blot法检测各组HUVECs中凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl一2表达情况。结果 与PBS对照组相 比，高浓度葡萄糖组中HUVECs细胞中sA—p一半乳糖苷酶染色阳性率显著上升 (P0．05)，端粒酶逆转录酶 mRNA表达显著下降(P0．05)。而当不同浓度 Klotho蛋白和高糖同时作用HUVECs时，细胞中SA一31一半乳糖 苷酶染色阳性率逐渐下降(P0．05)，端粒酶逆转录酶mRNA表达则逐渐上升 (P0．05)；高浓度葡萄糖组 中 HUVECs细胞凋亡率显著上升 (P0．05)，抑制凋亡 Bcl一2蛋白表达显著下降(P0．05)，而促进凋亡Bax、p53 蛋白表达显著上升(P0．05)。不同浓度 Klotho蛋白和高糖同时作用 HUVECs时，细胞凋亡率逐渐降低 (P 0．05)，抑制凋亡Bcl一2蛋白表达显著上升(P0．05)，而促进凋亡Bax、p53蛋白表达显著下降(P0．05)。结论 抗衰老Klotho蛋 白能够抑制高糖诱导的HUVECs细胞衰老和凋亡，并通过诱导人端粒酶逆转录酶mRNA、Bcl一 2蛋白表达，抑制Bax、p53蛋白表达发挥作用。 【关键词】 Klotho蛋 白；高糖；人脐静脉血管内皮细胞；衰老；凋亡 Klothoproteininhibitsapoptosisandsenescenceofhumanumbilicalveinendothelialcellinducedbyhighglucose． ZHANGJun ，DAIWen—jing，ZHOUJing—qun，ZHANGJia—jun，CAOZhi—gang． IntensiveCareUnit，RenheHos— pital，ThreeGorgesUniversity，Yichang443000，China Correspondingauthor：ZHOUJing—Qun．E—mail：zhoujingqun一1@medmail．con．cn A【bstract】 Objective Toinvestigatetheinhibitoryeffectsofanti—agingKlothoproteinonapoptosisandsenes— cenceofhumanumbilicalveinendothelialcell(HUVECs)inducedbyhighglucoseanditsmechanismofaction．Methods HUVECsculturedinvitroweredividedintoPBScontrolgroup，low ucosegroup(5．5mmol／L)，highglucosegroup (33．3mmol／L)，0．1mol／LKltho+33．3mmol／Lglucosergoup，1mol／LKltho+33．3mmol／Lglucosegroup．10mol／L Kltho+33．3mmol／Lglucosergoup．andweretreatedaccordinglyfor48h．SenescenceofHUVECsineachgroupwasde— terminedbySA—p—galactosidasestaining．Thehumantelomer