Lck-Cre×Perp flox flox条件敲除小鼠的繁育及基因型鉴定.pdfVIP

成都医学 学报 2014年第 9卷第 2期 JournalofChengduMedicalCollege，2014，Vo1．9，No．2 doi：10．3969／j．issn．1674—2257．2014．02．002 · 论 著 · Lck-CreXPerpflox／flox条件敲除小 鼠的 繁育及基因型鉴定 冷潇 ，周艳 ，唐海 明 ，张祥 ，刘佳 ，杨佩 ，王衍堂H (1．成都医学院基础医学院免疫教研室，成都 610083；2．四川大学华西第二医院急诊医学科 ，成都 610041) 【摘要】 目的 制备 Cre-LoxP重组酶系统调控下的T淋 巴细胞 Perp基 因条件性敲除的纯合子小 鼠并进行 鉴定，为进一步在整体动物水平研究 Perp基因在 T细胞发育以及在 自身免疫疾病发病 中的作用提供研究平台。 方法 将 引进 的Perp条件敲除小 鼠和 T淋 巴细胞特异性表达 Cre重组酶的 Lck-Cre小 鼠分别进行繁殖和鉴定， 然后将两种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定，其子代基因型为Lck—Cre×Perp“ 的小 鼠即为 本实验所构建的T细胞 Perp基 因特异性敲除的纯合子小 鼠。结果 Lck—Cre×Perp“ 的纯合子小 鼠被繁殖 成功并准确鉴定 Lck-Cre×Perp““小 鼠脾脏 CD3 细胞 的 Perp基 因的 RNA及 蛋 白表达水平与 Lck—Cre× Perp 小 鼠相 比显著降低 。结论 本研究利用 Cre—LoxP技术成功构建 了T细胞特异性敲除Perp基 因的纯合 子小鼠，为进一步研究 Perp基因在 T淋 巴细胞发育 以及 自身免疫性疾病发病中的作用提供 了优 良的工具 。 【关键词】 Perp；Lck—Cre；Cre—IoxP系统 【中图分类号】 R392．5 【文献标志码】 A ReproductionandGenotypingoftheLck-CreXPerp。ox／“。ConditionalKnock-OutMice LENG Xiao ．ZHOU Yah ． TANG Hal—ming ，ZHANG Xiang ，L儿，Jia ，YANG Pei，WANG Yan—tang (1． Departmentof Immunology，Schoolof BasicMedical Sciences，Chengdu MedicalCollege，Chengdu 610083，China；2． DepartmentofEmergencyMedicine，WestChinaSecondHospital，SichuanUniversity，Chengdu610041，China) [Abstract] 0bjective TogeneratetheT lymphocyte～specificPerp knock—outheterozygousmice，forthe follow—upresearchoftheroleofPerpgeneinT ceilsdevelopmentandautoimmunedisease．Methods Theimported Perpconditionalknock—outmiceandLck—Cremicehadreproducedandgenotypedrespectively，thenthetwostrains ofmicewerecrossed．theoff—spring micewhich genotyping Lck～Cre × Perp weretheheterozygousmice． Results Lck—Cre × Perp ’。micewerebreedsuccessfullyandtheirgenotypewereidentifiedaccuratelybyPCR andwesternblot．TheexpressionlevelofPerpinspleenCD3 T lymphocytesof