组培苗生产流程5 初代培养.doc

组培苗生产流程5 初代培养 【学习目标】 生产流程5-1 初代培养主要方式 生产任务5-1 根初代培养 【知识目标】 了解植物根初代培养方法、培养条件，熟练掌握无菌操作规程，能独立进行植物根初代离体培养。 【技能目标】 能根据具体培养材料进行无菌操作，完成离体根初代培养。 【相关知识】 离体根的组织培养首先无性系就可进行其他的实验研究首先要建立起获得大量无性系的方法。根伸长后从根尖10～12mm的根尖并接种于培养基中，这些根的培养物每天大约生长10毫米， 4天后发育出侧根，1周后，即切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长并长出侧根，又可切下进行培养，如此反复切接就可得到从单个根尖衍生的无性繁殖系。 离体根培养一般应用100ml的三角瓶，内装50ml培养液，如果对离体根进行长时间的培养，就要采用大型器皿，例如可用盛有500～1000ml的发酵瓶。根据需要可在瓶中添加新鲜培养液继续培养或将跟进习惯分割转移后继代培养，为避免培养过程中培养继成分变化对生长的影响，可采用流动培养的方法。 3.离体根培养的培养基 离体根培养所用的培养基多为无机盐离子浓度低White培养基。若使用无机盐离子浓度高的MS、B5时，必须将其浓度稀释到2/3或2/1。 4.影响离体根生长的因素 （1）基因型 不同植物对培养的反应不同。如番茄、马铃薯、烟草等植物的离体根能快速生长并产生大量健壮的侧根，可进行继代培养而无限生长；有些植物如萝卜、向日葵的根能较长时间的培养，但不能无限，久之失去生长能力。一般情况下，木本植物的离体根培养难于草本植物；处于旺盛生长期的根系和根尖易于培养。这说明不同的植物类型，需要提供相应的培养条件，而且即使在同一生长条件下，由于营养、代谢和基因型的差异也会表现出生长特性上的差异。 （2）营养条件 离体根的生长要求培养基含有全部的必需元素。它能够利用单一的硝态氮或铵态氮。在适宜的pH条件下，硝酸盐的效果较为良好B1和维生素B6最重要，缺少则根的生长受阻，一般使用浓度为0.1～1.0mg/L。糖是培养基必不可少的附加物，一般以蔗糖为最好，使用浓度应稍低，如玫瑰生根的蔗糖浓度为2%。但在禾本科植物离体根的培养中，葡萄糖的效果则较好。维生素类物质中，最常用的为硫胺素(B1)和吡哆醇(B6)。在各类植物激素中，以生长素研究得较多。从离体根对生长素的反应，可以表现为：生长素抑制离体根的生长，如樱桃、番茄、红花槭生长素促进根的生长，如欧洲赤松、白羽扁豆、玉米、小麦离体根的生长有赖于生长素，如黑麦，小麦的一些变种赤霉素能明显影响侧根的发生与生长，加速根分生组织的老化；激动素则能延长单个培养根分生组织的活性，有抗“老化”的作用。激动素(1.5%)的条件下对番茄离体根的生长有抑制作用，但是在高浓度蔗糖(3%)的条件下激动素赤霉素赤霉素 （4）PH 培养适宜的pH范围随培养材料和培养基的组成而发生变化，一般为5.0～6.0。如在番茄根的培养中，用单一硝态氮作为氮源时，培养基的pH应为5.2；用单一铵态氮源时，pH7.2为最好。水稻根的培养在pH3.3～5.8的范围内随pH的升高而加速；此外，当pH升高（pH5.8～6.2）时铁会发生沉淀，造成培养基中缺铁。 （5）光照和温度 离体根培养的温度一般以25～27℃为最佳，要求在遮光条件下培养。 【生产任务实施】 胡萝卜离体根的初代培养 一、 了解。熟练。二、(500ml)、无菌滤纸、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%酒精、胡萝卜肉质根、母液、培养瓶、移液管、95%酒精、饱和漂白粉、0.1%氯化汞、无菌水等。 三、MS+IAA1.0mg/L+KT0.1mg/L。 3.培养 置于25℃恒温箱中暗培养。接种几天后，外植体表面开始变得粗糙，有许多光亮点出现(这是愈伤组织开始形成的症状)，3～四、注意事项 五、 项目及 内容 学生姓名 生产任务5-1 胡萝卜根初代培养 小组成绩20% 理论知识考核30% 实践技能考核50% 组间评奖 10% 教师评价10% 外植体选择与处理10% 外植体灭菌方法10% 培养条件10% 外植体灭菌25% 外植体接种25% 生产任务5-2 普通茎尖初代培养 【知识目标】 了解植物茎尖初代培养方法、培养条件，熟练掌握无菌操作规程，能独立进行根尖离体初代培养。 【技能目标】 能根据独立完成茎尖剥离及无菌操作，完成离体根尖初代培养。 【相关知识】 茎尖是植物组织培养常用的外植体。这是因为茎尖不仅生长速度快，繁殖率高，不易产生遗传变异，而且是获得脱病毒苗木的有效途径。茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。茎尖分生组织培养主要是指对茎尖长度不超过0.