济宁地区LH-β基因exon 3突变与多囊卵巢综合征的相关性研究.pdfVIP

生 物 医 学 工 程 研 究 2olO Journal ofBiomedicalEngineeringResearch… 。●29(2)_：…139～l14_l1 济宁地 区LH—l3基因 exon3突 变与多囊卵巢综合征的相关性研究 王芳，王香菊，王岁 (济宁医学院附属金乡IK院，济宁272200) 2．3 主要仪器及试剂 1 引 言 TaqDNA聚合酶，dNTP，限制性 内切酶 EcoO109 多囊 卵巢综 合 征 (polycysticovarysyndrome， I，50bpDNA、100bpDNAMarker购 自宝生物工程 PC0s)是青春期及育龄妇女最常见的内分泌和代谢 (大连)有限公司，引物由上海博亚生物技术工程有 紊乱性疾病 ，发生率 占育龄妇女的4％～12％l1-2J， 限公司合成 。 其生理病理的主要特征为卵巢分泌过多的黄体生成 2．4 方法 素(LH)和睾酮(T)[3-53，发病原因尚未明确，其高度 2．4．1 DNA抽提 于月经第2～3天或闭经患者任 的家族聚集性提示与遗传有关[6J。LH水平增高 何时期，抽取外周静脉血 5Ⅱd，取 500~／I全血，用 或LH作用增强在 PCOS的发病机制中起关键的作 EDTA抗凝 ，采用天根生化科技 (北京)有限公司的 用。LH是由LH—a和LH—p链构成的，LH一8链决 TIANampBlood血液基因组 DNA提取试剂盒，按药 定了LH的特异性 。LH一 链 由LH—p基 因编码 ， 盒说明进行操作，无水乙醇沉淀，提取基因组 DNA， 因此，LH—l3基因的突变或变异是否与 PCOS的高 自然干燥后一20℃保存备用。 LH、高T水平有关值得我们深入研究。 2．4．2 引物设计 参照文献[9]报道的序列设计引 物 ：引物 1：5’一AGTCTGAGACCTGTGGGGTCA 2 对象与方法 GCTT一3’，弓I物 2：5’一GGAGGATCCGGGTGT CAG GGCTCCA一3’。 2．1 研究对象 2．4．3 PCR反应 反应体系 25 ，含基因组 DNA PCOS组为 2006年 7月至 2007年 7月在济宁医 0．7 ，25 mM Mgd21．5 ，2．5 mM dNTPs2 ， 学院附属金乡医院不孕不育门诊就诊的金乡及周边 各县区(均为济 宁地 区)PCOS患者 168例，年龄 50pmol／tA引物各 0．25 l，TaqDNA聚合酶 (5UI) (30．91±7．54)岁，已婚 132例，未婚 36例，已婚者不 1．5 。循环条件 ：94~C预变性 5min，94~C1min， 66．2℃1min，72℃1min，35个循环；最后72％延伸 孕年限为2～10年。对照组为同期在本院不孕不育 门诊因输卵管阻塞或男方因素就诊的患者 156例， 10min。 2．4．4 电泳分离DNA片断 扩增 Ⅲ 一l3基因第 3 月经周期正常，无内分泌紊乱，高血压及糖尿病家族 外显子(exon3)区域含有丝氨酸 Ser1∞(A )代替甘 史，年龄(30．73±6．52)岁，年龄及婚姻状况与PCOS