病毒的电镜照片.ppt

《医学微生物学》第六次实验 1、接种途径：鼻内、皮内、脑内、皮下、腹腔或静脉； 2、根据病毒种类及亲嗜性不同，选择敏感动物及适宜接种部位； 3、选择幼年动物。 上页 退出 下页 返回 退出 总目录 下页 退出 南华大学病原学实验教学中心 Etiology Experimental Teaching Center of University of South China 实验内容 病毒的分离与鉴定（电教） 病毒的电镜照片（示教） 病毒的分离培养技术及病毒所致细胞病变（示教） 病毒血凝试验和血凝抑制试验（示教） 观察解剖活鸡胚（示教） 一、病毒的电镜照片 病毒体积很小，形态多样，必须用电子显微镜观察。 超薄切片：常用的超薄切片厚度是50-70nm。 染色方法：磷钨酸盐负染色 病毒在人胚肾细胞的胞浆中复制； 双排串珠样排列的病毒颗粒，胞浆中有较多的核蛋白颗粒； 超薄切片，扫描电镜图90,000倍。 （一）脊髓灰质炎病毒的电镜照片 （二）甲型肝炎病毒的免疫电镜照片 标本：潜伏期甲肝患者的粪便； 免疫电镜：经与甲肝病人恢复期血清37℃30分钟后，4℃过夜,经40 000转/分离心，染色； 25nm左右的空心颗粒,表面附有短丝状免疫球蛋白； 扫描电镜图300,000倍。 用人胚肾细胞培养病毒 病毒颗粒在核内呈晶格样排列 超薄切片，扫描电镜图40,000倍。 （三）腺病毒的电镜照片 动物接种 鸡胚培养法 组织培养法 二、病毒的分离培养技术 （一）动物接种： （一）动物接种： 乙脑V小白鼠脑内接种 尿囊腔 （二）鸡胚培养 接种步骤 鸡胚培养 9～11d 筛选鸡蛋 38～39℃孵育 找出气室 钻孔 接种病毒液0.1～0.2mL 胶布封口 孵育48～72h 4 ℃冰箱过夜 吸出羊水 血凝试验 1、细胞的准备 2、接种病毒 3、检测病毒增殖： 细胞病变效应(Cytopathic effect, CPE)可作为病毒是否在细胞内增殖的指标之一 （三）细胞培养 细胞变圆、肿胀、坏死、脱落； 细胞融合，形成多核巨细胞（融合细胞）； 形成包涵体： 正常HeLa细胞 感染HSV-2的HeLa细胞 细胞病变效应 细胞变圆、肿胀、坏死、脱落 麻疹病毒感染细胞 呼吸道合胞病毒感染细胞 细胞病变效应 细胞融合，形成多核巨细胞（融合细胞） 取材：犬海马回脑组织印片 H-E染色 细胞病变效应----包涵体 狂犬病毒包涵体（Negri body） 形成包涵体：某些V感染细胞后，在胞核内或胞浆内形 成的圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的团块。 三、病毒的血凝试验和血凝抑制试验 （一）血凝试验(hemagglutinin test, HA) 用 途： *检测病毒的存在 *滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量 (1个 血凝单 位＝106病毒颗粒) 原 理 V(HA)+鸡红细胞(HA受体） 鸡红细胞凝集 室温60～90min 操作方法 1 2 3 4 5 6 7 8 9 生理盐水 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:5流感病毒液 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 稀释倍数 10 20 40 80 160 320 640 1280 0.5％鸡红细胞 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 摇匀，室温60～90min后观察结果 弃去0.5 结果判断：以发生50%凝集者(++)为该病毒血凝效价， 其稀释度即为一个血凝单位。 （一）血凝试验(hemagglutinin test,HA) 结果判断： +： 红细胞均匀铺于管底 - ： 血球于管底形成一个小团，边缘光滑圆润 （二）血凝抑制试验（HI） V(HA)+抗HA＋鸡红细胞(HA受体） 血凝抑制 室温60～90min ?原理 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 NS 0.45 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.45 0.25 0.5 血清 0.05 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25