免疫血清的概念.ppt

*  免疫血清的制备 第二节 抗血清的鉴定和保存 一、抗血清的鉴定 二、抗血清的保存 第三节 抗血清的纯化 一、特异性IgG抗体 二、单价特异性抗血清 第一节 抗血清的制备 一、免疫动物的选择 二、免疫程序 三、动物采血法 概述 利用微生物及其代谢产物等特异性抗原作为免疫原，经反复多次注射同一动物体，这样所生产的含有特异性抗体的血清，被称为免疫血清或高度免疫血清，亦称为抗血清。 使用这种通过人工免疫法获得的免疫血清，可治疗或预防某些相应的疾病，并且具有很高的特异性。 用作被动免疫，对相应传染病进行治疗或紧急预防，效果佳良，是紧急防疫和治疗药品中的一种特效制剂。 免疫血清的概念 高度免疫血清之所以具有预防和治疗急性传染病的作用，是由于它含有特异性免疫球蛋白—抗体。 抗病血清或抗毒素血清，具有很强的特异性，一种血清只对相应的一种病原微生物或毒素起作用。 免疫血清的作用机理 根据免疫血清作用的对象不同，可将其分为抗病血清和抗毒素两类。 近几年来，卵黄抗体已成为免疫血清的重要替代品，而且越来越受到人们的重视。卵黄抗体可以在一定程度上克服血清抗体成本较高、生产周期较长的弱点，并且具有用同批动物连续生产的优点。 目前生产较多的抗病血清有：抗猪瘟血清、抗炭疽血清、破伤风抗毒素，此外还有禽用的小鹅瘟血清、小鸭肝炎血清和法氏囊病血清。抗毒素包括破伤风抗毒素、肉毒抗毒素以及抗大肠杆菌肠毒素等。 免疫血清的种类 目前，虽然免疫血清的生产量不大，但是抗病血清的特殊作用仍是不容忽视的。有些病的治疗虽然可以使用抗生素类制剂，而要彻底控制和消灭传染病，在特定情况下，抗病血清的作用是抗生素不能全部代替的。 免疫血清用作紧急预防注射，通常是在已经发生传染病或受到传染病威胁的情况下使用，其优点是注射后立即产生免疫，疫苗是起不到这种作用的。但是这种免疫力维持时间较短，一般仅2-3周，因此，在注射血清后2-3周仍需再注射一次疫苗，才能获得较长时间的抗传染能力。 在人工被动免疫中，以抗毒素血清的效果最佳，应用最广，如破伤风抗毒素、肉毒抗毒素和葡萄球菌抗毒素等。抗毒素血清必须早期应用才能效果显著，如果症状十分明显之后，即使大量应用也效果极差。 免疫血清的应用 动物的选择 免疫原的生产 制定免疫程序 血液的采集与血清的提取 测试、分装、保存 免疫 纯化 检验 免疫血清的基本制备过程 第一节 抗血清的制备 抗血清的制备是将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体 多克隆抗体的产生示意图 多克隆抗体(polyclonal antibody,pcAb)：天然抗原刺激多种B淋巴细胞克隆产生的多种抗体的混合物 表位A 表位B 表位C 抗原 克隆A 克隆B 克隆C 多克隆抗体 单克隆抗体 抗原来源与动物种属的关系 种属差异越远，免疫原性越强 动物个体的选择 适龄、健康、体重符合要求 抗原的性质 按需要量选择大小不同的动物。 一、免疫动物的选择 能作免疫接种用的动物主要是哺乳类和禽类 如兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。 免疫原的剂量 中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 免疫间隔时间 第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天 免疫途径 皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结 二、免疫程序 二、免疫方法 3.免疫方案 ①全量免疫法：弗氏佐剂抗原多次注射 ②微量免疫法：卡介苗7天弗氏佐剂1月 抗原 ③混合免疫法：综合皮下、淋巴结和静脉 1.免疫原的注射剂量 2.免疫途径：免疫反应产生速度依次为静脉＞ 腹腔＞肌肉＞皮下＞皮内＞淋巴结＞足掌 颈动脉采血法：家兔、绵羊、山羊 心脏采血法： 家兔、豚鼠、大鼠、鸡 静脉采血法： 家兔、山羊、绵羊 三、动物采血法 第二节 抗血清的鉴定和保存 抗体特异性的鉴定：双向免疫扩散法 抗体效价的鉴定：凝集试验 、双向免疫扩散试验、ELISA 抗体纯度的鉴定：SDS、双向免疫扩散试验、免疫电泳 抗体亲合力的鉴定：平衡透析法、ELISA、RIA竞争结合试验 一、抗血清的鉴定 2℃～8℃保存：短期保存 冰冻保存：保存5年 真空干燥保存：保存5～10年 二、抗血清的保存 第三节 抗血清的纯化 抗原免疫动物制备的抗血清是成分复杂的混合物，除含有特异性抗体外，还存在与目的抗体不相关的成分。纯化目的是除去这些不相关成分，防止抗血清中其他杂抗体干