遗传性疾病的分子诊断-上海交通大学医学院医学检验系.ppt

分子诊断的临床应用 上海交通大学医学院 樊绮诗 教授 1953年Watson 和Crick 提出脱氧核糖核酸的双螺旋结构模型。 1990年人类基因组计划正式启动。 2001年2月科学家宣布完成人类基因组的全部序列图。 一、基因检测在感染性疾病中的应用 SARS相关冠状病毒的分子诊断 2003年4月，香港研究者Peiris等报告了50 例SARS病人的临床表现和病毒学研究结果。 一种新的冠状病毒 (Coronavirus) 是SARS 的致病原因。 (Lancet, 2003, 361: 9365) 2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规和实时定量PCR技术。 on April 10, 2003） 检测标本 痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液 、血浆、粪便。 检测方法 1. 逆转录-巢式PCR (Reverse-Nested PCR) 2. 逆转录-实时PCR (Reverse-Real time PCR) 有报道显示，在可能SARS病人中病毒的检出率为100%。 在疑似SARS病人中的检出率为23%。 所有健康接触者中未检测到病毒。 另一项研究显示 检测病毒的3种方法（血清学检测、病 毒分离、PCR技术）中，PCR技术的检出率 最高。 讨 论 疾病的早期即可获得阳性结果(早于血清转换期）。 SARS患者中的阳性率约为80%，对照中的阴性率约为98%～100%。 现有的PCR方法有较高的特异性但灵敏度较差，阴性结果不能排除病毒感染。 讨 论 痰液中病毒RNA浓度极高，说明病毒从呼吸道排放是主要传播途径。 血清中检测到极低浓度的病毒RNA，提示病毒复制不仅发生于呼吸道。 病人恢复晚期的粪便中存在病毒RNA，说明粪便可能也是一种传播途径。 鼻、咽拭子中含有的病毒RNA显著少于痰液，提示不适合作为标本（有可能漏检）。 SARS相关冠状病毒基因检测必须注意的问题 必须在规范的基因扩增实验室中进行。 应采取必要的质控规程，包括阳性对照和阴性对照。 阳性结果时必须对原始样本重复检验： 或者扩增另一个基因片段 或在另一个实验室对同一样本进行检测。 肝炎病毒基因的检测 临床价值主要体现在： 病情评估 血清中病毒含量的多少与肝脏病理损害程度相关，病毒载量越高，肝组织炎症反应程度越重。 疗效预测 治疗前病毒核酸载量越高，疗效越差；载量越低，机体清除病毒的可能性越大。 预后判断 病毒核酸载量持续处于高浓度者预后不良。 垂直传播途径感染者，预后较差。 反映肝细胞损害的其它指标正常，但病毒核酸 水平经常波动者更易发展为肝硬化。 病毒分型和耐药检测 各个编码区段存在着大量有意义的自然变异或药物诱导的变异，并由此产生不同的变异株，从而导致 HBV感染的不同血清学和临床表现。 检测HBV的变异株对了解疾病机制、药物耐受和指导用药有一定的价值。 HPV基因的检测在预防宫颈癌中的作用 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，每年约有50万左右新发病例。 我国每年有新发病例约13.15万，占世界宫颈癌新发病例总数的26%。 持续的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV) 感染是引起宫颈癌和癌前病变的必要因素，93.0%-99.7%的宫颈癌组织中均可检测到HPV DNA。 高危型HPV-16和HPV-18分别占宫颈癌的50%和14%。高危型HPV的持续感染可使患宫颈癌的风险增加250倍。 HPV DNA的检测方法 实时定量PCR (Real time PCR) 核酸杂交捕获（Hybrid CaptureⅡ，HCⅡ） HC Ⅱ可一次检测所有致癌的13种高危型HPV。 敏感度：对CIN Ⅱ、Ⅲ和癌的检出率为 98%。 阴性预期值：对高度鳞状上皮细胞病变或更高度 病变的阴性预期值99.9% 细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。 细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。 基因检测在监测移植物排斥中的作用 关于多瘤病毒 人类多瘤病毒中常见的3种病毒：BK、JC、SV40。 BK病毒于1971年首次从肾脏移植受体的尿液中分离出。病毒主要在宿主的细胞核内进行复制。 在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。 感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。 B