培养基性能确认参考文件.doc

培养基性能确认方法 1. 目的 培养基性能确认法是为确认培养基的性能而进行的检测，证明培养基的性能，从而可以信赖所检测出的实验结果。 2. 范围 : 配制的培养基，每次培养时，购买的培养基，每次购买时都要确认其性能。 3. 设备及试剂 (1) Incubator – 20~25℃, 30~35℃ (2) 平皿 (内直径 9 cm) (3) Loop - 10 ? (cat No. 251586 ; NUNC) (4) Spreader (cat No. 90050 ; SPL) (5) Micropipet, 灭菌 Tip (1 mL 容量, 0.1 mL 容量) (6) Tube (10 mL 容量) (7) 铂金线 (8) 70% 乙醇 4. 检测方法 (1) 培养基性能确认使用的标准菌株 1) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) (金黄色葡萄球菌 ; S. aur) 2) Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633) (枯草芽孢杆菌 ; B. sub) 3) Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) (大肠埃希菌 ; E. coli ) 4) Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) (白色念珠菌 ; C. alb) 5) Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) (铜绿假单胞菌 ; P. aer) 6) Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) (沙门氏菌 ; S. abo) (2) 性能确认 1) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基, B. sub, S. aur 和 C. alb 菌种 Ampoule ，开封后，各倒入平皿中。每株试验菌平行制备 2 个平皿。加灭菌的生理盐水 100?，水化(Re-hydrate)检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为 45℃ 的 TSA，分别倒入每个平皿约15~20ml, 混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿，细菌在30 ~ 35℃培养5日，C. alb在20 ~ 25℃度培养5日。 为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在30 ~ 35℃，培养5天，做空白阴性对照实验。 培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/2~2倍。 标准菌种 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) 菌落照片 培养前 培养后 2) 沙氏葡萄糖琼脂培养基 [ Sabouraud dextrose agar (SDA) ] ① 配制 标准菌种中 C. alb 菌种Ampoule，开封后，倒入平皿中。 每株试验菌平行制备 2 个平皿。加灭菌的生理盐水 100?，水化(Re-hydrate)检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为 45℃ 的 SDA，分别倒入每个平皿约15~20ml, 混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿， 在20 ~ 25℃度培养5日。 为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在20 ~ 25℃，培养5天，做空白阴性对照实验。 培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/2~2倍。 标准菌种 Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) 菌落照片 培养前 培养后 3) 乳糖肉汤培养基 [ Lactose broth (LB) ] 标准菌株E. coli，加入10ml 乳糖肉汤培养基中，于培养30 ~ 35℃培养箱中培养18 ~ 24h。用接种环蘸取培养液涂布于EMBA平板上，在30 ~ 35℃培养18 ~ 24h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。 培养后，培养皿出现标准菌种的特征，视为阳性。 标准菌种 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) 选择培养基 伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA) 菌落特征 金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落 菌落照片 培养前 培养后 4) 麦康凯琼脂培养基 [ MacConkey agar (MCA) ] 标准菌株