wang 2.2动物细胞工程幻灯片.ppt

供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵母细胞 注入 细胞融合 重组细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体奶牛遗传基本相同的犊牛 归纳 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵母细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作；含有激发细胞核全能性的物质。 3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状。 2.体细胞核移植过程 （MⅡ卵母细胞） 减数第二次分裂中期 去核的卵母细胞 供体细胞注入去核卵母细胞 受体细胞激活，完成减数分裂、发育 胚胎移植 2、为什么不是取供体细胞核进行核移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？ 保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。 1、受体细胞为什么选用卵母细胞？ 卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性的某种物质和营养物质。 2.体细胞核移植的过程 P49 讨论： 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自具有优良性状动物提供的体细胞。 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。 2.体细胞核移植技术的应用前景 1、在畜牧业中可 以加速家畜遗传 改良的进程。 2、保护濒危物种。 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植。 克隆动物的研究意义 1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体 4.保护濒危动物 3.体细胞核移植技术存在的问题 ⑴许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。 ⑵成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。 体细胞核移植技术存在的问题 许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。 在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。在应用上，生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。 一、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 3.融合过程： 诱导融合的方法？ 诱导方法： 物理方法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇（PEG) 为什么灭活的 病毒能作诱导剂？ 3.融合过程： 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 使用的酶 诱导方法 主要用途 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 5.应用： 最重要的用途是 制备单克隆抗体 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？ 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 单克隆抗体的制备 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体 利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 设计方案： 1、过程 注射抗原 已免疫的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 骨髓瘤细胞 免疫小鼠 单克隆抗体 筛选 克