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第六章 高效毛细管电泳分离模式 separate types of HPCE 一、毛细管区带电泳(CZE) capillary zone electrophoresis 二、毛细管凝胶电泳(CZE) capillary gel electrophoresis 三、胶束电动毛细管色谱 micelle electrokinetic capillary electrophoresis 四、毛细管等电聚焦(CIEF) capillary isoelectric focusing 五、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis 分离类型 八种分离类型，介绍常用的几种； 根据试样性质不同，采用不同的分离类型； 每种机理的选择性不同； 毛细管区带电泳(CZE)亦称毛细管自由溶液区带电泳，是毛细管电泳中最基本也是应用最广的一种操作模式，通常把它看成其它各种操作模式的母体。它是基于分析物表面电荷密度的差别进行分离的。实验中，在毛细管和电解池中充以相同的缓冲液，样品用电迁移或流体动力学从毛细管一端导入，施加电压，样品离子在电场力驱动下以不同的泳动速度迁移至检测器端，形成不连续的移动区带分离出来 在CZE中，需要控制的主要操作变量是电压、缓冲液的pH和浓度、添加剂、进样电压和时间。同时，合理优化选择柱温、分离时间、柱尺寸、进样和检测体积、溶质吸附和样品浓度等也将大大提高柱效。CZE还可通过改变电渗流的方向来选择分析待测的离子。 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用广的分离模式； Applications of CZE Wide variety of applications Small molecules Macromolecules (proteins, peptides) Advantages Simple Direct analysis of complex systems Limitations Must have different charges Low ionic strength sample 二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。 MECC是Terabe在1984年首先提出的。最大优点是使毛细管电泳在用于离子型化合物分离的同时进行中性物质的分离，这样大大提高了CE分离生化物质的能力，具有广泛的应用前景。它是一种基于胶束增溶和电动迁移的新型液相色谱。 三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 将表面活性剂加入缓冲液中，当其浓度超过临界浓度时即可形成含有疏水性内核的胶束，因胶束相类似于色谱中的固定相称为“准固定相”。溶质在准固定相和流动相水相间分配，在水相中的迁移受电渗流的支配，而在胶束相中的迁移是电渗流和胶束电迁移共同作用的结果。不同物质根据其分配系数及电迁移淌度的不同而被分离。 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5.色谱与电泳分离模式的结合。 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； 机理 Schematic of MEEKC process 通常用作表面活性剂的化合物有四类，即阴离子、阳离子、