GFP转基因裸鼠脾脏组织学观察-中国试验动物学报.DOCVIP

GFP转基因裸鼠脾脏组织学观察 方 天，尤金炜，张立波，田小芸，刘彪，吴正林，许龙祥，周森妹，赵志刚，恽时锋＊ （南京军区南京总医院比较医学科，全军实验动物科普与伦理教育基地， 全国科普教育基地，江苏南京，210002；） 摘要： 目的 探讨GFP基因导入对BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学及免疫功能的影响。 方法 取不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c荧光裸鼠及BALB/c普通裸鼠各32只，雌雄各半，处死取脾脏，对脾脏的绝对重量、脾脏指数进行测量分析，对脾脏的组织学改变进行观察，并对脾脏淋巴细胞数进行统计分析。 结果 与14日龄荧光裸鼠相比，28日龄荧光裸鼠脾脏指数明显较高（P0.05）。与14日龄荧光裸鼠相比，49日龄、70日龄荧光裸鼠淋巴细胞数明显变少（p0.05）。与普通裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）相比较，相同日龄荧光裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）淋巴细胞数明显减少（p0.05）。 结论 GFP基因对不同日龄荧光裸鼠的脾脏发育及其功能有一定影响。 关键词： GFP基因；荧光裸鼠；脾脏；免疫功能 引言 BALB/c裸小鼠是先天性胸腺缺陷的突变小鼠,目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。特别是在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面，它有着特殊的价值。目前已将nu基因导入不同近交系动物，成为系列动物模型，我国所应用的自发性免疫缺陷小鼠，主要应用的是BALB/遗传背景的裸鼠。 BALB/c荧光裸鼠是将GFP基因导入BALB/c-nu/nu小鼠而得。来源于水母( Aequorea Victoria) 的绿色荧光蛋白( Green fluorescent protein, GFP) , 现已成为细胞生物学和分子生物学中应用最广泛的分子标记之一。GFP转基因裸鼠因自身含有标记蛋白与普通裸鼠相比而具有明显的优势，但在饲养以及繁殖过程中发现，荧光裸鼠繁殖率低、存活率低下，更难获得适宜于实验的荧光裸鼠。这一现象与GFP基因对小鼠发 [作者简介]方天（1984-），女，硕士，南京军区南京总医院比较医学科技师。 [通讯作者]恽时锋（1965-），男，主任技师，教授，博士，研究生导师，从事医学实验动物学工作。 育存在一定毒性的报道不谋而合。带GFP的C57BL/6 小鼠与BALB/c裸鼠杂交，并与BALB/c裸鼠回交，产生BALB/c绿色荧光裸鼠C57BL/6中插入的GFP绿色荧光蛋白基因序列号为：GenBank L29345.1，同时转入鸡β-actin 启动子序列；原始导入的外源基因：包括GFP基因，和控制其表达的promoter（chicken beta-actin promoter）， 同时转入巨细胞病毒的增强子，增强GFP基因表达。本实验应用这两种动物模型，观察脾脏组织学变化，探讨基因的导入对脾脏组织学形态及功能是否有影响。 1 材料和方法 1.1实验动物分组与饲养 不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c荧光裸鼠雌雄各半不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c普通裸鼠32只，雌雄各半BALB/c荧光裸鼠BALB/c普通裸鼠1.2实验方法与研究指标 1.2.1 脾脏绝对重量和脾脏指数的测定 每组动物按在实验设计中的日龄处死，称重，无菌条件下取出脾脏称重。用小鼠脾脏的重量除以各自体重，求相对湿重即为脾脏指数，以mg/g表示。 1.2.2光镜观察 脾脏组织经常规石蜡包埋、切片、苏木精-伊红（HE）染色。光镜下观察脾脏组织形态差异。计算并比较各组切片淋巴细胞数：1.2.3荧光显微镜下观察 28日龄荧光裸鼠的脾脏取出后制作成冰冻切片用荧光显微镜在480nm激发光下进行观察；14日龄、28日龄、49日龄、70日龄取出脾脏后立即用荧光显微镜在480nm激发光下进行观察。 1.3统计学处理 数据以均数±标准差表示，采用SPSS11.5统计学软件包分析。2 结 果 荧光裸鼠与普通裸鼠体重、脾脏绝对重量和脾脏指数经方差分析发现，同一日龄荧光裸鼠与裸鼠之间体重、脾脏绝对重量和脾脏指数差异无统计学意义。荧光裸鼠组各日龄阶段比较结果如下：与14日龄组荧光裸鼠比较，28日龄组体重、脾脏绝对重量和脾脏指数明显增大（0.05）；49日龄组体重、脾脏绝对重量明显增大（0.05），但脾脏指数差异不显著；70日龄组体重、脾脏绝对重量明显增大（0.05），脾脏指数差异也不显著（表1）。 各日龄阶段脾脏切片HE染色结果：同一日龄阶段的荧光裸鼠与普通裸鼠相比，14日龄、28日龄、49日龄、70日龄荧光裸鼠脾脏淋巴细胞数较少，淋巴细胞密度稀疏；并含