实用HPLC方法的建立幻灯片.ppt

5 色谱分析中各种图谱现象的判断5.1 基线噪音的产生和处理 可能产生的原因及处理办法 1 流动池脏，用极性试剂清洗。当有填料进入，拆开流通池。 2 检测器灯有问题，如能量偏低，更换氘灯。 3 周期性的波动，则起源于泵的脉冲，检修泵或更换垫片等。 4 温度对检测器的影响，控制温度。 5 气泡经过检测器，用大流量冲洗。 6 可能难出峰的样品连续不断出来，用强极性流动相冲柱。 7 流动相本底高，如水的纯度不够，换超纯水。或试剂纯度不够， 换色谱纯的试剂。 8 注意数据采样和连接问题。 Time (min.) 5.2 基线漂移（上漂和下漂） 1 柱中的流动相没有平衡，延长平衡时间，尤其在流动相中添加了有紫外吸收的添加剂。 2 在梯度洗脱中，基线上漂是正常的，在空白梯度中有可能是柱子中有杂质洗出。其次是流动相中有干扰物。换流动相。 3 温度不稳定（示差检测器），控温。 4 在等度分析中，样品缓慢洗出，改变淋洗液强度或用梯度分析。 5 样品进入检测器，吸附在池中，可能每进样一次，本底一次比一次高，很少见。 5.3 倒峰的产生和消除 1 柱切换的脉冲效应，一般不是很明显，必要时考虑换阀。 2 在低波长分析时，流动相本底比较高时，而样品用本底低的流动相溶解，肯定出现倒峰，其程度同进样量和本底差有关。解决办法，用流动相溶解样品，减少进样量，消除倒峰的影响。高波长时,影响比较小。 3 如果倒峰不影响峰的分离，对外标法定量不影响。但影响面积归一化法。 4 样品中有比流动相本底低的物质存在，如无机盐等，将出倒峰。这种情况下，倒峰的位置不一定在死体积位置出现（大多数在死体积位置出现）。 5.4 鬼峰的产生和消除 1 样品分析时峰没出完，在下一针或下下一针出现，判断办法，延长分析时间，计算可能出现的保留时间。然后调整流动相。 2 连续进样，在某个位置出现忽高忽低的峰，最可能是进样针污染，清洗进样针，注意黑垢的干扰，有些样品易残留在针管里。可重新取样分析。 3 定量管污染，处理方法同上。 4 在死体积位置出现的小峰，可能是柱切换造成的。 5 流动相与样品溶剂不一致，也会出现鬼峰，尤其在低波长时，出现位置在死体积的地方。 6 气泡，如果有小气泡通过流通池，也出现随机的假峰，大气泡存在，其出现的峰往往直上直下，脱气解决。 7 样品发生变化反应，重新取样快速分析。 5.5 峰前移或退后的判断 1 有规律的变化一般可能是流动相没平衡，如低浓度的缓冲液或离子对试剂，样品对pH变化极敏感。 2 温度变化，当天气变化快，分析时间长，比较明显，用柱温箱，空调解决此类问题。 3 流动相挥发，尤其用挥发性的酸时，时间长了酸度会发生变化，流动相新鲜配置。 4 仪器尤其泵的运行时间长后，重现性不好，仪器老化，在梯度分析时尤其明显，也可能流速不稳，或有气泡。 5 在分析某样品后，柱子可能发生改性，再次分析重现性变差，清洗或再生柱子。 6 进样浓度不一，溶剂不一，也会造成保留时间不一致。 5.6 前沿峰和拖尾峰的判断和处理 5.6.1 前沿峰的产生和处理（对称性小于0.9) 1 色谱柱漏穿，柱效明显偏低，柱压偏低，如所有峰都出现，换柱。 2 样品溶剂极性远大于流动相，局部改变了流动相平衡体系，办法是减少进样量，更换样品溶剂。 3 分离不完全，有大量峰重叠，（如系列物），办法，改变流动相，采用梯度洗脱。 5.6.2 拖尾峰的判断和处理（对称性大于1.2） 1 色谱柱柱头塌陷，有死体积，柱效明显下降，所有峰都如此，换柱。 2 色谱柱填料流失，例如C18在碱性流动相中，一般是使用较长时间后造成的，换柱。 3 用C18柱分析碱性化合物，可用BDS柱或未端封尾柱，或在流动相中添加减尾剂（三乙胺等）。 4 过载或超载，有可能在检测器上由于灵敏度差，响应小，办法，减少样品浓度和进样量。 5 保留性太强，出峰太迟，办法，增加洗脱强度。 6 管路有死体积，或连接管路太长，或在管路中有保留。 7 分析体系不合理，如苯基多磺酸类的化合物在酸性的有机相中分离，会出现正三角形的峰，解决办法，用离子对试剂，改变pH。 8 在分离过程中，可能发生结构变化，或存在结构互变，办法，用其它分析体系。 9 分离不完全，后面带有小峰，采用梯度或改变流动相。 10 样品溶解体系同流动相不匹配，样品在柱子中析出。 5.7 色谱双峰的判断 1 柱头或筛板堵塞，污染，处理办法，清洗筛板或对柱头填料修补。问题是柱效会下降。 2 溶剂极性太强或在二相中差异太大，换溶剂，或减少进样量。 3 过载，减少进样量，或进样体积。 4 采样频率过快，降低采样频率。 5 样品的溶解度，样品难溶于流动相时，会出现。 6 存在互变异构现象，双峰基本齐平。