试验考试习内容细菌鉴定技术.ppt

细菌鉴定技术;常用细菌生化反应;1.糖发酵试验;1.糖发酵试验;;2.吲哚试验（靛基质试验）;;3.甲基红试验;;4.V-P（Voges-Proskauer）试验;;5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验;;6.克氏双糖铁（KIA）复合试验;6.克氏双糖铁（KIA）复合试验;双糖铁培养基;7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验;;请记住： ;;伤寒沙门菌KIA（K A－＋）MIU（＋－－）;沙门菌IMViC试验（－＋－－）;志贺菌KIA（K A－－）MIU（－－－）;志贺菌IMViC试验（－＋－－） ;肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋） ;肺炎克雷伯菌IMViC试验（－－＋＋）;产气肠杆菌IMViC试验（－－＋＋）;变形杆菌KIA（K A+ + ）MIU（+ +/- +）;血浆凝固酶试验： 1）原理：金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶（凝聚因子），可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中的血浆发生凝固。 金黄色葡萄球菌的凝固酶阳性，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的凝固酶阴性。　;【原理】 氧化酶或称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。作氧化酶试验时，此酶首先使细胞色素C氧化，然后氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。 【方法】取滤纸一角，沾取菌落少许，加试剂一滴，阳性者立即粉红色，并于5-10秒内呈现深紫色。;【原理】过氧化氢酶可使过氧化氢分解为分子态氧。 【方法】 滴加3%过氧化氢溶液数滴于玻片上，挑取固体培养基上的菌落少许于过氧化氢溶液，观察结果。 【 结果】 30s内产生大量气泡者为阳性。;【原理】某些细菌能产生尿素酶分解尿素，产氨使培养基变碱。 【方法】将被检菌接种尿素培养基，35℃培养18～24h观察结果。阴性时应继续观察4d。 【 结果】酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性 。变形杆菌阳性，大肠埃希菌阴性。;【原理】当细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上生长分解枸橼酸钠，使培养基变碱。 【方法】在枸橼酸盐琼脂斜面上浓密划线，接种被检菌，于35℃培养1～4d，逐日观察结果。 【 结果】枸橼酸盐培养基斜面上有细菌生长，培养基变蓝为阳性；无细菌生长、颜色不变（绿色）为阴性。 大肠埃希菌：阴性 产气肠杆菌：阳性 ;涂片;⑴初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。 ⑵媒染 滴加(Lugol)碘液，染1min，水洗。 ⑶脱色 滴加95%乙醇，脱色30s立即水洗，以终止脱色。 ⑷复染 滴加蕃红，染色30s ，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。;注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。 ;抗酸染色法;操作过程;;细菌接种： 固体平板培养基 接种方法：分区划线法 固体斜面培养基 接种方法：划线法 固体高层斜面培养基 接种方法：穿刺划线法 半固体培养基 接种方法：穿刺法 液体培养基 接种方法：液体接种法;