7-动物细胞传代培养.doc

报告成绩 实时记录成绩 实验七 动物细胞传代培养 学生姓名 学号 班级 座位号： 同组同学 日期： 年 月 日 备注： 【Introduction】 （1） 动物细胞培养需要无菌操作，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染，不受其他有害因素影响，空气要保持清新和干燥。 （2） 在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下，原代细胞是很好的实验材料，如药物测试、研究细胞分化等。原代培养也是建立各种细胞系（株）必经的阶段。 传代培养是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。在细胞一代中，细胞约能倍增3～6次。 【Materials methods】 实验器材： 培养用液：完全培养基（合成培养基加入5%~10%血清）；平衡盐溶液；消化液；抗生素液。 实验操作： （1） （2）.5ml，轻洗→再加0.5ml胰酶置于培养箱中消化两分钟 （3）~8次 （4） （5）【Results】 去观察。 ） （2）倒置显微镜观察细胞：细胞分布均匀，密度为40%左右，大部分细胞贴壁铺展良好，类似梭 【Discussion】 答：培养细菌或者感染，时应当果断快速，不要犹豫。 结果不理想，浑浊，可能是已经被污染了细胞过少，可能是吸吹过程中太大造成了细胞破裂也是箱条件不适合生长或者太紧了没有。 答：为了防止被污染，所以要小心操作 另外，在吹细胞的时候不能太次数，否则细胞物理。后要否则应该离心培养时应该把瓶口松，留一些空隙让细胞呼吸。 答：太容易破了，希望可以换好一点的。组的太长了，可以先做实验再等待的时候讲述概念性的东西【Questions】 方法2]。 真菌污染：这在细胞培养中是比较常见的，尤其是在炎热、潮湿的季节。此种污染容易发现，肉眼观察大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面，镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错于细胞之间。用氟康唑可以去除细胞培养中的真菌污染[3]。 支原体污染：这是目前细胞培养中最常见、不易被察觉、干扰实验结果的一种污染。支原体在镜下呈暗色微小颗粒，并有类似布朗运动的表现，多位于细胞表面和细胞之间。 若给你一株从你未培养过的细胞株，你应该怎样做才能将该细胞株顺利传代培养？？ 答：准备细胞室各种实验器材然后细胞株相应培养基培养方法多设计几个找到最佳培养方案按照一般细的步骤操作实验过程中保持无菌，有污染。 【References】 [2]王鸿,张伟,孟娜. 细胞培养中珍贵贴壁细胞污染挽救方法的评价[J]. 首都医科大学学报,2011,01:129-134. [3] 实验七 动物细胞传代培养 学生姓名 学号 班级 座位号： 同组同学 日期： 年 月 日 备注： 【】 具体步骤（贴壁生长细胞传代） 备注 消毒 75%酒精消毒双手、工作台面、培养瓶、瓶盖、试管，并过火焰。用酒精棉球擦拭培养用液瓶盖→打开瓶盖在酒精灯火焰上烧一下，盖上瓶盖，但不必拧紧 瓶口打开前、打开后、关闭前，都要在火焰上消毒 消化 将培养瓶内的旧培养液倒掉 ①吸取胰酶2ml→从侧面加入瓶内→用吸管向瓶壁吹吸7-8次→将胰酶倒出 ②吸取胰酶0.5ml→加入瓶中，加入时直冲细胞贴壁处，平放轻摇，使酶液漫过整个瓶底部→放置2分钟 吸管口和枪头不要碰到瓶口 中止消化 ①吸取MEM培养液2.5ml加入培养瓶→混匀后加入离心管，离心1000转/分钟，5min，弃去上清液。 ②加入1ml完全培养基，吹打，取离心管中1/3溶液加入原培养瓶，再加入3ml完全培养基混匀。 离心后要缓慢取出，尽量少晃动离心管，否则应该重新离心 细胞传代 将培养瓶口及盖过火焰后拧紧→做上标记→将传代好的培养瓶放置于合适温度的培养箱中（视不同细胞要求而确定培养温度）培养，1-2天后观察。 37℃、5％CO2培养 细胞生物学实验2014-2015（1）