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蛋白质的测定方法k9860凯氏定氮仪..doc

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蛋白质的测定方法k9860凯氏定氮仪.

粗蛋白的测定(K9860凯氏定氮仪) 一、实验目的:掌握常见饲料原料、饲料及样品中粗蛋白的测定方法。 二、实验原理:各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如硫酸铜、硫酸钾、硫酸钠或硒粉)的帮助下,用浓硫酸进行消化作用,使蛋白质和其它有机态氮都转变成NH4+并与浓硫酸化合成硫酸铵,而非含氮物质,则以CO2、H2O、SO2状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏,释放出铵态氮,用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵,然后以甲基红-溴甲酚绿混合作指示剂,用HCl标准溶液(0.1 mol/l)滴定,求出氮的含量,根据不同的饲料再乘以一定的系数(通常用6.25计算),即为粗蛋白的含量。 三、实验试剂: 1. 溴甲酚绿四、1 检查仪器 1.1检查瓶盖是否旋紧,必须确认不漏气、不漏液; 1.2检查进出水、排液管道是否通畅; 1.3在整个测试过程中,若仪器出现异常,应立即暂停操作。 2 开机 开机前必须先打开冷凝水开关,然后打开电源开关。 3调试开机后的界面上会显示“调试、测试、查询”字样,光标默认在“调试”,按“确定”键进入“调试”状态。 3.1 按“选择”键选中“滴定”,然后“确定”,让机器吸滴定用的盐酸润洗管道及排除其中的空气(非常重要),约需45-50秒,然后选择“排液”,重复2-3次。注意观察吸收瓶里的加入量(下拉把手即可看见)。 3.2 按“选择”键中“硼酸”,让机器吸硼酸润洗管道,约需3-4秒,然后选择“排液”,重复2-3次。注意观察吸收瓶里的接入量(下拉把手即可看见)。 注意:盐酸用量较少,硼酸可多用点,先盐酸后硼酸。4 检测 选择“测试”(或者从菜单上面通过“选择”键,选择“测试”,然后“确定”),进入样品测试。 4.1 空白值:每次开机测一批样品,都要测系统空白值。做法如下:放上干净的空消化管,密封好。设置好参数后,选择“测试”,机器会自动进行测试。更换消化管,重复几次,待测值稳定后(盐酸变化值在0.05ml范围内较好),算出盐酸标定的平均值,即为空白值。做此空白值是为了消除系统误差。 4.2 设定参数:设定参数如下,样品重量为;滴定酸摩尔数为0.1mol/L;蛋白转换系数为6.25;空白值(设为4.1所测定的值);定标系数为系统默认。 4.3 硫酸铵的含氮量为21.19±0.2%21.19±0.2%内为止。 4.4 测定:按“确认”键开始测定,机器将自动依次进行“排液、加硼酸、加碱、蒸馏、滴定、排液”过程。“滴定”结束后,系统将自动打印结果。“排液”结束后,光标处于“继续”位置。 4. 取下消化管,换上下一个样品,重复步骤4.2和4.3,继续测定。5 关机 5.1 关闭电源,将消化管取下,换上一根干净的空消化管,密闭好。 5.2 将机身、消化管仓、试剂仓和机器周围桌面反复擦洗,清理干净。 5.3 用洗衣粉将消化管洗涤干净,最后用蒸馏水润洗后放到60℃烘箱中烘干,收到消化管架中。注意:消化管价格昂贵,洗的时候要轻拿轻放。 五、注意事项: 5.1开机前必须打开冷凝水开关。 5.2仪器使用前要首先确定蒸馏水桶内水量是否充足,如水量不足请加入足量蒸馏水,以免影响仪器正常使用。5.3仪器的内部存储器按样品编号存储的,因此用户应注意样品编号的设置,存储器是循环使用的,样品编号范围是1-1000,请不要轻易修改样品编号。 5.4在配制碱液、酸液的过程中要小心操作,以免被化学试剂灼伤。 仪器中有玻璃器皿,因此在搬运过程中,需要当心。 在需要修理仪器内部部件时,一定要关机并拔掉电源线,同时等待蒸馏系统冷却下来。 排废液的管路的出口要比仪器安放的高度要低,以使排液畅通。 仪器长时间不用时,应将碱液桶中的碱液倒掉,并加入清水;将消化管装上,手动加碱,将管路中的碱液加到消化管中,并用清水清洗管路,防结晶堵塞。 为保证测试结果的准确,仪器每次开机后先做一个空白样品,用以清洁仪器管路。 消化管内最大溶液体积不超过消化管体积的2/3。

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