鉴别和选择培养基的配制.doc

几种常用鉴别和选择培养基的配制 一、目的要求 了解选择培养基和鉴别培养基的配制原理。 学习和掌握马丁培养基、含氨苄青霉素的LB培养基及伊红美蓝琼脂培养基的配制方法。 二、基本原理 马丁培养基及含氨苄青霉素的LB培养基两者均属选择培养基。马丁培养基常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素(30 u／m1)不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G+细菌生长，而链霉素对多数G-细菌具抑制生长作用。所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响．从而达到分离真菌的目的。含氨苄青霉素的LB培养基在基因工程研究中常用于筛选具有氨苄青霉素抗性的菌株。培养基中含有一定浓度(100μg/ml培养基)的氨苄青霉素，它能杀死培养基中一切不抗氨苄青霉素的细菌，而只有对氨苄青霉素具有抗性的细菌才能正常生长繁殖，从而达到快速筛选氨苄青霉素抗性菌株的目的。 伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。 三、实验材料 (一)药品 葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，胰蛋白胨，酵母提取物，NaCl、乳糖、K2HP04 、伊红、美蓝、琼脂等。 (二)溶液 0.1％孟加拉红溶液、链霉素溶液(10000u／m1)、2％去氧胆酸钠溶液、氨苄青霉素溶液(25mg／m1)、2％伊红溶液、0.5％美蓝溶液、1mol/l NaOH、1mol/l HCl溶液等。 (三)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅等。 (四)玻璃器皿 移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 (五)其他物品 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。 四、实验内容 (一)马丁培养基的配制 1．培养基成分 葡萄糖 1g 蛋白胨 0.5g KH2P04·3H2O 0.1g MgSO4·7H2O 0.05g 0.1％孟加拉红溶液 0.33ml 琼脂 1.5-2g 蒸馏水 100ml 2％去氧胆酸钠溶液 2ml（预先灭菌，临用前加入） 链霉素溶液(10000u／m1) 0.33ml（临用前加入） 自然pH 2．配制方法 (1)称量 称取培养基各成分的所需量。 (2)溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量，然后依次逐一溶化培养基各成分。按每100ml培养基加入0.33m1的0.1％孟加拉红溶液。 (3)定容 待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。 (4)加琼脂 加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。 (5)分装、加塞、包扎。 (6)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。 (7)临用前，加热融化培养基，候冷至60℃左右，按每100 m1培养基无菌操作加入2m1的2％去氧胆酸钠溶液及0.33m1的链霉素溶液(10000u／m1)，迅速混匀。 (二)含氨苄青霉素的LB培养基的配制 1．培养基成分 胰蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g 琼脂 1.5-2g 蒸馏水 100ml 氨苄青霉素溶液(25mg／m1) 0.4ml（临用前加入） pH 7.0 2．配制方