课程论文多糖酶制剂果树褐变.doc

白灵菇多糖读书报告 多糖是来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞中的天然大分子物质，一般多糖常由一百个以上甚至几千个单糖通过糖苷键连接而成。多糖是所有生命有机体的重要组成部分，并与维持生命所需的多种生理功能有关。对多糖的研究， 最早是在20世纪40年代，但自50年代末人们发现真菌多糖具有抗肿瘤活性以后，尤其是近二十多年来，由于分子生物学、免疫物质的化学研究与发展以及新药物资源的寻找与开发，多糖的研究才受到越来越广泛的重视，相继多次召开了有关“糖生物学和糖工程”的专题会议，并对多糖来源、提纯、结构分析、生物活性、产品开发应用等方面做了大量的研究工作，取得了巨大的进展[1]。 白灵菇(Pleurotus nebrodensis)是白灵侧耳的商品名称，又名白阿魏菇、白阿魏蘑、阿魏侧耳，属于真菌门、担子菌纲、伞菌目、侧耳科侧耳属[2,3]，是近几年发展起来的食用菌新秀之一。白灵菇生物活性有效组分食药用真菌多糖的含量很高；其子实体多糖和液态深层发酵培养过程中产生的真菌多糖入药有消积杀虫的作用，对腹部肿痛、腹部肿块、癌症等均有显著疗效[4]。目前，白灵菇多糖的药用价值及其应用已为世界各国重视。近年来，国内的研究重点已经由白灵菇的栽培及菌种的驯化[5-8]转移到白灵菇多糖的提取及活性功能等方面。笔者依据近期科研成果，论述了白灵菇多糖的提取、分离纯化、深层发酵及活性功能等方面的研究进展。 1.白灵菇多糖的提取、分离、纯化及结构鉴定 1.1提取与分离 多糖是由20多到上万个单糖组成的大分子，在生物体内多糖除以游离状态存在外，也以结合方式存在。结合型多糖有与蛋白质结合在一起的蛋白多糖和与脂质结合在一起的脂多糖等。多糖的提取要根据多糖的存在形式及提取部位不同而采用不同的提取方法[9]。董洪新等[10]以白灵菇干子实体为原料，研究了白灵菇子实体多糖的提取工艺。试验表明，碱提法的多糖得率比水提法提高2.82倍，提取多糖的最高得率为8.74%；酸浸提法的多糖得率比水提法提高1.38倍；碱提法得率最高。但碱提法所得的多糖溶液粘度太大，过滤困难，且对多糖的立体旋光活性结构有一定破坏作用，影响其生理活性；酸提法同样可能对多糖成分有一定破坏作用，且对容器的腐蚀性较大；相比而言水浸提法成本低、方便实用。许金国等[11]采用70℃热水浸提法，经95%乙醇沉淀、离心，蒽酮比色法测定白灵菇干子实体多糖最高得率为6.95%，比董洪新等经过优化的最佳提取温度85℃、 提取时间4h、乙醇浓度80%等条件下所得多糖得率5.38%高出0.29倍。董洪新等[12]又将热水浸提过的子实体残渣加8倍量3%的三氯乙酸浸提，经浓缩、醇析沉淀、丙酮洗涤、真空冷冻干燥得酸提水溶性粗多糖PFA。总的来看，以上采用的酸提、碱提、热水浸提等方法虽然都是提取多糖的经典方法，但水浸提法时间长、效率低，而酸碱法又极易导致多糖的立体结构破坏及生物活性改变，因此，探索更为高效、经济、可靠的提取方法具有现实意义。白灵菇子实体、 菌丝体中除多糖外，还含有一定量的蛋白质、胶质和粗纤维等成分，如能采用有关酶类对白灵菇菌丝体和子实体进行预处理， 将会有利于其糖类物质的溶出和分离， 从而提高多糖的提取率；或者借助超声波、微波等辅助手段来提高其多糖的提取率。近几年，陈石良等[13]已采用复合酶解法并结合热水浸提，提高了灰树花菌丝体多糖的提取率，其干菌丝体多糖得率达7.4%。陈哲超等[14]采用复合酶解法提取香菇干子实体多糖，不仅提高了多糖的得率以及其他有效成分的提取率，而且改善了糖类的分布。胡稳奇等[15]采用盐析法提取香菇、草菇干子实体多糖， 在提高了多糖得率的同时，还降低了生产成本。李钟玉等[16]采用超声波法提取灵芝干子实体多糖，缩短了提取时间45min，提取率比酸浸提对照组高2.12%。但是截至目前，利用复合酶解法、超声波辅助法、盐析法等提取白灵菇多糖的研究还少有报道。 1.2 纯化与结构鉴定 李永泉等[12]采用Sevag法除去白灵菇菌丝体粗多糖中的蛋白，确定了最佳除杂蛋白3因素参数：V样品:V氯仿-正丁醇=2:1， V氯仿:V正丁醇=2:1，抽提时间40min；粗多糖用离子交换纤维素DEAE-cellulose32柱纯化，然后将所得浓缩液用Sephadex G-100于室温下进一步纯化，最后得多糖纯品，含糖量83.22%。采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对多糖进行纯度鉴定，再用紫外光谱进一步分析，确定其不含蛋白质和核酸等杂质。最后通过红外光谱和核磁共振分析，确定了多糖HYZH的单糖组成为甘油、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖；糖苷键连接方式有1→3和1→6,其中主链是1→3键，侧链是1→6键。甘勇等[17]以阿魏菇子实体和菌丝体为实验材料，采用水浸法提取阿魏菇粗多糖，与李永泉不同的是，其用CTAB络合、乙醇沉淀、