香兰素的提取..doc

实验 香兰素的提取 1、材料与方法 1.1 材料 咖喱粉 1.2 试剂 95% 乙醇、无水乙醇、甲醇、NaOH、姜黄素、香兰素、硼酸、碳酸钠、氯化钠、盐酸、二氯甲烷、 亚硫酸氢钠、环己烷，均为分析纯。D-101大孔吸附树脂、CAD-40 大孔吸附树脂。 1.3 仪器设备 HH-2数显恒温水浴锅；SHB-IV双循环水式多用真，空泵；FA2004N 电子天平；22PC 可见分光光度计；YHG-500-BS远红外快速干燥箱；AP-02B真空泵；RE-52A旋转式蒸发器；D7401-4型电动搅拌器；Waters 515泵高效液相色谱仪；NovapakC18 分析柱；lichrospherC18分析柱。 　　　　　　　　 1.4 工艺流程 由咖喱粉提取香兰素的工艺流程如图所示 图1 姜黄素的提取工艺流程 1.5 方法 1.5.1 乙醇法提取姜黄素 姜黄素在95%乙醇中的溶解度较大，最大吸收波长为425nm，最大吸收值为0.695[7]。因此，在本研究中以印度咖喱粉为原料，选用95% 乙醇作为提取剂，进行提取条件对提取率影响的实验。 1.5.1.1 温度对姜黄素提取率的影响 称取5g咖喱粉，置于200ml烧杯中，加入95%乙醇100ml，分别调节水浴温度为35、45、55、65、75、85℃，加热2h，真空泵抽滤，记录下滤液的体积数，再将滤液稀释若干倍后，于425nm处测定吸光度并计算提取率。 1.5.1.2 时间对姜黄素提取率的影响 称取5g 咖喱粉，置于200ml 烧杯中，加入95%乙醇100ml，调节水浴温度55℃，分别加热0.5、1、1.5、2、2.5h，真空泵抽滤，记录下滤液的体积数，再将滤液稀释若干倍后，于425nm处测定吸光度并计算提取率。 1.5.1.3 固液比对姜黄素提取率的影响 称取5g咖喱粉，置于200ml烧杯中，分别加入95%乙醇25、50、75、100、125、150ml，调节水浴温度55℃，加热2h，真空泵抽滤，记录下滤液的体积数，再将滤液稀释若干倍后，于425nm 处测定吸光度并计算提取率。 1.5.1.4 提取次数对姜黄素提取率的影响 称取5g咖喱粉，置于200ml烧杯中，加入95%乙醇100ml，调节水浴温度55℃，加热2h，真空泵抽滤，记录下滤液的体积数，再按同样的条件提取2、3、4次，将滤液合并，再将滤液稀释若干倍后，于425nm处测定吸光度并计算提取率。 1.5.2 大孔树脂吸附法精制姜黄素 根据本研究的目的，选择弱极性的D-101型和非极性的CAD-40型大孔吸附树脂分别进行吸附实验，比较二者的吸附性能。 1.5.2.1 大孔树脂的预处理 分别称取D-101 型和CAD-40 型大孔吸附树脂各100g，置于烧杯中，加入95%乙醇充分浸泡4h，从孔中赶出空气泡。浸泡后，用蒸馏水冲洗三次。再用5%氯化钠溶液洗三次，5% 碳酸钠溶液洗三次，以去除痕量的防腐剂和残留的单体化合物。再用蒸馏水反复洗至中性。 1.5.2.2 大孔树脂的选择 分别称取相同质量已预处理的两种树脂于100ml的锥形瓶中，再各加入乙醇法提取的姜黄素稀释液，然后将锥形瓶放在振荡器上振荡24h，至吸附饱和，每隔一段时间测定吸附液在425nm的吸光度，计算两种树脂对姜黄素的吸附率。取己经吸附了姜黄素的两种大孔树脂于100ml的锥形瓶中，在室温下各加入无水乙醇，静态解吸6h，每隔1h测定解吸液在425nm的吸光度，从而计算两种树脂的解吸率。 分别取5ml洗脱液进行硼砂实验，检定洗脱液中是否含有姜黄素，然后根据两种树脂的洗脱液在425nm处的吸光度，选择具有相对深颜色且吸光度大的洗脱液的大孔树脂。最后将解吸液在旋转式蒸发器中蒸发回收乙醇。 1.5.3 由姜黄素转化为香兰素的工艺研究　 1.5.3.1 酸碱处理 在配有搅拌装置、水浴装置和冷凝器的三颈烧瓶中，加入水和NaOH，再加入姜黄素，加热回流24h后，搅拌加入HCl溶液(pH1)，再加入二氯甲烷，倾析。回收下层水的液相部分，为溶液A 。 1.5.3.2 亚硫酸氢钠处理 室温下于三颈烧瓶中加入水和亚硫酸氢钠，再将溶液A 加入，倾析，回收上层水相，得到溶液B 。在同一烧瓶中加入溶液B 和二氯甲烷，慢慢加入37%HCl，倾析，回收下层有机相，得到溶液C，浓缩，最后在环已烷中重结晶，得到纯香兰素产品。 1.5.4 香兰素的测定方法 目前常见的香兰素含量测定方法有:薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱- 质谱联用法、硫代巴比妥酸法、离子选择电极法等。本研究中选用高效液相色谱法和硫代巴比妥酸法进行香兰素的检测。 香兰素标准溶液的配制：称取香兰素固体纯品0.1000g于5 ml烧杯中，以甲醇溶解，再移入100ml容量瓶中，定容至刻度，相当于香兰素1.00mg/ml。样品的配制及处理：称取样品0