几种真菌的分离与鉴定.doc

常见真菌的分离与鉴定 病原真菌的一般特性 真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。 一、基本性状 （一）形态结构 真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。 1．菌丝（Hypha） 真菌在合适的环境中，由孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状，称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝。主要见于病原性真菌。很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝。有些菌丝可呈各种特殊形式，如球拍状、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。 2．孢子 生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有5种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌属于不完全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。 （1）厚壁孢子：当真菌在不利环境中，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。 （2）关节孢子：菌丝断裂形成长方形两端略钝圆的孢子叫关节孢子。如白地霉和粗球孢子菌。 （3）孢子囊孢子：为鞭毛菌和接合菌的无性生殖形式。孢子囊中所含的孢子来源于分枝菌丝或胞囊梗顶端膨大形成孢子囊，囊内原生质浓缩集聚，割裂而成，一般数目较多，孢子囊形态多样，因种而异。 （4）芽生孢子：由菌细胞出芽生成，见于念珠菌及隐球菌，前者（类酵母菌）出芽后孢子伸长呈丝状，但不见与母细胞分离，称为假菌丝，在假菌丝上的收缩点也可出芽成芽生孢子。 （5）分生孢子：是子囊菌和半知菌的无性孢子，也是半知菌分类的主要依据，单细胞的分生孢子称小分生孢子，有蒂或无蒂，侧生或游离，分散或成群，圆形、梨形、卵圆形或其它形状，表面粗糙或光滑，或有或无各种纹饰。多细胞的分生孢子称大分生孢子，有纺锤形、棒形、球棍形、镰刀形及其它形状，两端尖或圆或一端圆，厚壁或薄壁，壁光滑或粗糙，有色或无色，分隔有多有少。 （二）培养特性及繁殖方式 1．培养特性 大多数真菌对营养要求不高，只需要水、盐，简单的氮源及碳水化合物就可生长，一般常用沙堡氏琼脂基（主要成分葡萄糖4%、蛋白胨1%、琼脂2%）培养都能生长。但需要弱酸性（pH 4～6）、较低孵育温度（22～28℃），充分温度和氧气供应才能生长良好。侵害内脏的某些真菌在37℃含血的培养基中生长良好。真菌生长都比较缓慢，大多需孵育数天后才成明显菌落，菌落有下列三种类型： （1）酵母型菌落：外观湿润稠软致密，类似一般细菌菌落，镜检只见有圆形或椭圆形生芽细胞（例如隐球菌的菌落）。 （2）类酵母型菌落：外观性状似酵母型菌落，镜检除见有出芽的细胞外，尚可见到假菌丝（例如念珠菌的菌落）。 （3）丝状型菌落：由多数分枝的菌丝体向上生长组成疏松的绒球状，表面有很多孢子，显示各种色泽，菌落可呈棉絮状 绒球状 粉末状或石膏样，其正面和背面可显示各种不同色素，常作为鉴定菌种的参考。镜检可见有纵横交织的菌丝及各种孢子（例如各种癣菌的菌落）。 2．繁殖方式 有多样性，包括出芽增殖，菌丝增长，菌丝分枝和断裂，产生无性孢子及有性孢子进行繁殖，因此它繁殖力很强，但生长速度较慢。 （三）变异性和抵抗力 真菌很容易发生变异，在人工培养基中多次移种或孵育过久，就可出现形态结构、菌落性状、色素以及各种生理性状（包括毒力）的改变，用不同的培养基和温度培养真菌，其性状也有改变，真菌对干燥阳光