针刺对光老化大鼠皮肤组织CAT、GSH-Px及H2O2影响实验探究.doc

针刺对光老化大鼠皮肤组织CAT、GSH-Px及H2O2影响实验探究[摘要]目的：研究针刺对UV照射引起的皮肤光老化大鼠皮肤组织中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）和过氧化氢（H2O2）的含量的变化，探讨针刺对抗皮肤光老化的作用机理。方法：将大鼠随机分成4组，除正常组外，其余各组模拟日光中UV（UVA+UVB）照射，造成皮肤光老化模型，每次造模前，针刺组给予电针刺激，阳性对照组采用VE涂抹造模部位，15周后对比各组生化指标结果。结果：模型组与正常组比较大鼠皮肤组织中CAT、GSH-Px活性明显降低，H2O2含量明显增加(P＜0.05)；针刺组与模型组比较CAT、GSH-Px活性增加，H2O2含量明显降低(P＜0.05)，与VE组比较无统计学意义（P＞0.05）。结论：针刺可延缓UV引起的大鼠皮肤光老化，能增强皮肤组织中CAT、GSH-Px活性，降低H2O2含量。 [关键词]针刺；光老化；过氧化氢酶；谷胱甘肽氧化酶；过氧化氢 [中图分类号]R332 R758 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）06-0958-02 光老化导致皮肤过早出现干燥粗糙、皮沟加深、毛细血管扩张及色素异常沉着等损美性症状，严重影响了人们的外貌美观，针刺通过经络-腧穴的全身整合作用在美容抗衰老的治疗方面有突出疗效,可引起人体各系统生理、生化水平上多项指标同步变化。为了探讨针刺治疗皮肤光老化作用机理，本实验通过测定光老化大鼠皮肤组织中与衰老有关的CAT、GSH-Px的活性及H2O2的含量来研究针刺抗氧化、延缓衰老的作用。 1 材料和方法 1.1 实验动物与分组方法：健康雄性SD大鼠40只，体重（220±25）g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、针刺组、VE组。各组每5只放入一笼饲养，常规饲食和饮水，无不良因素影响，在相同的自然环境下饲养1周，待其适应实验室环境后开始进行实验。 1.2 主要试剂及设备：自制紫外线灯箱(40WUVB灯管4根，光谱集中在297nm；40WUVA灯管2根光谱集中在365nm)，UV辐照计(台湾路昌)，6805D电针仪，劲霸电推剪；CAT试剂盒、GSH-Px试剂盒、H2O2试剂盒（南京建成生物有限公司）；维生素E胶丸（天海药业）；-70℃冰箱、匀浆器、离心机、恒温水浴箱、分光光度计均由辽宁中医药大学实验教学中心提供。 1.3 实验方法：模型组大鼠不予任何治疗。针刺组大鼠在密封罐中用乙醚麻醉，昏迷后取出在大鼠固定架上捆绑，以28号0.5寸毫针针刺大鼠双侧“脾俞”、“肾俞”、“足三里”穴，直刺8mm，疏密波，刺激时间20min，以大鼠肢体或针柄微微颤动为度，每日一次,于针刺后30min开始造模。VE组大鼠于造模前30min，在背部剪毛区域内涂抹VE后造模。 1.4 造模方法：参考杨汝斌[1]SD大鼠皮肤光老化动物模型剂量及方法，每只大鼠均用电推剪剪除大鼠背部5.0cm×5.0cm区域内毛发，以后每次照射前用剃须刀剃除该部位的毛发。动物适应性喂养1周后，第2周开始将模型组、针刺组、VE组大鼠放入自制照射箱中，并置于距离光源30cm处的水平面上，第2周每天照射2h，第3～7周每天照射4h，第8～12周每天照射6h，照射以5天为一个周期，间隔2天，再开始下一个周期。至13周时终止UV暴露(UVA 照射强度累计为148.47J/cm2，UVB 辐照强度累计为48.67J/cm2)，继续观察1周。造模过程中每天观察动物背部皮肤有无水疱及糜烂等，如果出现上述症状，立即停止照射2～3天，至上述症状消失后再继续照射，直至造模成功。 1.5取材：15周后将各组大鼠断颈处死，迅速取背部光老化处皮肤组织全层,保存于-70℃冰箱中待测。 1.6 生化指标测量：紫外分光光度计分别测定各组大鼠皮肤组织中CAT、GSH-Px和H2O2的含量。 1.7 统计学方法：本实验数据采用SPSS（16.0）软件，运用多个样本均数比较的方差分析检验，数据以x±s表示，并用最小显著差法（LSD法）作两两比较。 2 结果与分析 2.1 各组大鼠皮肤组织中CAT活性比较：从表1可见，模型组大鼠皮肤组织中CAT活性明显降低，与正常组比较有统计学意义 (P＜0.05)；而针刺组CAT活性与模型组比较结果有差异(P＜0.05)，与正常组比较结果无差异(P＞0.05)，提示针刺提升了光老化大鼠皮肤组织中CAT活力，具有抗皮肤光老化作用，其疗效优于维生素E外用。 2.2 各组大鼠皮肤组织中GSH-Px活力比较：模型组大鼠皮肤组织中GSH-Px活力明显降低，与正常组比较有统计学意义 (P＜0.05)；而针刺组和VE组GSH-Px活力分别与正常组和模型组比