RUNX3蛋白表达基因甲基化及多态与胃黏膜病变的关系.PPT

1 RUNX3蛋白表达、基因甲基化及多态与胃黏膜病变的关系 李文庆 北京大学临床肿瘤学院流行病学研究室 研究背景—RUNX3与胃癌 基础研究证据：胃癌的候选抑制基因。 基础研究证据：与正常胃黏膜生理功能有关。 1. TGF-β通路的下游靶分子 2. 调控胃上皮细胞增殖和凋亡平衡，表达缺失致上皮显著增生 3. 调控胃上皮细胞分化，表达缺失使胃上皮向肠型细胞转化，发生IM 基础研究证据：RUNX3通过异常甲基化、遗传变异等导致产物或表达水平变化，在胃癌的发生、发展中起作用。 研究背景—散发病例关联研究证据 蛋白表达关联研究证据： 1. 胃癌组织中RUNX3表达水平明显降低。 2. 胃癌癌前病变中已有表达水平下调。 甲基化关联研究证据： 1. 胃癌组织的RUNX3甲基化水平升高。 2. 胃癌癌前病变中也有甲基化水平增加。 研究背景—RUNX3遗传变异 基础研究证据： 1. Li等：Arg122Cys突变导致抑癌活性的丧失 2. 错义突变、插入缺失突变，导致产物异常，破坏其功能 关联研究证据： 尚为数不多，且结论不一 存在问题和研究目的—表达和甲基化 现有关联性研究样本量小，涵盖胃黏膜病变种类少，医院散发病例，组织源于癌旁 存在问题和研究目的—遗传变异 功能研究和关联研究均较少 材料与方法 — 研究对象 研究对象：来自山东临朐胃癌高发现场 材料与方法 — 实验室分析 蛋白表达：免疫组织化学方法 结果判定：以细胞浆或细胞核棕黄色为阳性 四个等级：阴性 、弱阳性 、中度阳性和强阳性 甲基化：MSP (甲基化特异性PCR) 甲基化阳性对照：AGS细胞系；非甲基化：MKN细胞系 设立空白对照 遗传变异筛查: PCR-DHPLC-测序 (启动子区和编码区) 大样本基因多态检测：PCR-DHPLC (筛选出的多态位点) 材料与方法—统计学分析 RUNX3蛋白表达、基因甲基化及多态胃黏膜病变的关系: 非条件logistic回归 (SAS 9.1) 基因甲基化及多态与表达强度的关系: 非条件logistic回归 (SAS 9.1) 单倍型与病变的关系：haplo.stats (R语言) 研究结果 研究对象的基本资料 RUNX3表达与胃黏膜病变的关系 RUNX3基因甲基化与病变及表达强度的关系 RUNX3基因多态与病变及表达强度的关系 研究对象的基本资料 RUNX3表达与胃黏膜病变的关系 重度胃黏膜病变RUNX3表达阳性率明显降低。 重度胃黏膜病变RUNX3表达强度明显降低。 RUNX3甲基化与胃黏膜病变的关系 重度胃黏膜病变RUNX3甲基化频率明显增加 (Ptrend 0.0001)。 H. pylori感染者的甲基化频率明显高于非感染者 (OR = 1.42, 95% CI = 1.02-1.96)。 RUNX3甲基化与表达的关系 RUNX3甲基化与表达强度负相关，尤其在H. pylori感染者。 RUNX3遗传变异筛查结果 共在启动子和编码区发现8个SNP位点 基因多态与胃黏膜病变的关系 基因多态与RUNX3表达的关系 连锁不平衡分析和单倍型分析 讨 论 RUNX3蛋白表达与胃黏膜病变的关系 1. 蛋白表达阳性率与胃黏膜病变负相关。 既往证据：RUNX3表达与胃癌患病风险相关。 在IM组织也有表达的减少。 2. 蛋白表达强度与胃黏膜病变负相关。 RUNX3表达缺失和下调可能在重度胃黏膜病变的发病中起重要作用。 讨 论 RUNX3表达下调增加胃黏膜病变风险的可能机制 1. 通过剂量依赖的形式影响TGF-β信号传导，影响胃上皮增殖和凋亡。 既往证据：Runx3 KO鼠细胞胃上皮过度增殖，凋亡减少，黏膜增生。 2. 影响胃黏膜肠上皮化生。 既往证据：Runx3 KO鼠胃上皮Cdx2表达增加，诱导分化为肠型细胞。 讨 论 RUNX3表达下调可能在胃黏膜病变演变为IM的过程中起作用，且该作用持续在更高水平病变中存在。 1. SG/CAG与IM/Ind DYS/DYS表达差异大。 2. DYS组趋势略有波动：样本量 3. 重度胃黏膜病变之间表达差异小，总体仍呈下降趋势。 抗体识别全长RUNX3蛋白，可检测两