共载siRNA与多西他赛的透明质酸修饰的还原敏感型纳米粒质量评价.PDF

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１６，４７（４）：４２９－４３６ ４２９ 共载ｓｉＲＮＡ与多西他赛的透明质酸修饰的还原敏感型 纳米粒质量评价 １ ２ ３ １ １ 李亚楠 ，王　珏 ，李　霁 ，沈　雁 ，涂家生 １ ２ （中国药科大学药剂学教研室，南京２１０００９；中国食品药品检定研究院，北京１０００５０； ３中国药科大学药理学教研室，南京２１０００９） 摘　要　研究和评价共载特异性抑制环氧化酶（ＣＯＸ２）表达的小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）和多西他赛（ＤＴＸ）的透明质酸修饰二 硫键交联的聚乙酰亚胺（ＰＥＩｓｓ）与聚乳酸羟基乙酸共聚物（ＰＬＧＡ）形成的还原敏感型肿瘤靶向纳米粒（ＤＴＸ／ｓｉＣＯＸ２／ ＨＲＰＳＰＮＰｓ）的体外质量。首先，通过溶剂挥发法制备ＤＴＸ／ｓｉＣＯＸ２／ＨＲＰＳＰＮＰｓ，同时制备不含二硫键交联的透明质酸修 饰的ＰＥＩＰＬＧＡ纳米粒（ＤＴＸ／ｓｉＣＯＸ２／ＨＰＰＮＰｓ）作为对照。结果显示，两者ＮＰｓ呈核壳圆形，粒径处于１５０～２００ｎｍ之间， 体外释放实验表明，ＤＴＸ／ｓｉＣＯＸ２／ＨＲＰＳＰＮＰｓ中的ＤＴＸ在２４ｈ内呈现缓释行为，且ＨＲＰＳＰＮＰｓ在ｐＨ５０中８ｈ时的累积 释药量较ｐＨ７４中释药量高１０％～２５％，证明酸性条件更有利于纳米粒中ＤＴＸ的释放，具有肿瘤微环境敏感性。体外细 胞摄取实验表明，当Ｎ／Ｐ比为４０／１，孵育时间在１４～１６ｈ时，纳米粒的摄取量最高，受体靶向抑制试验显示，ＨＲＰＳＰＮＰｓ能 特异性结合ＣＤ４４受体，具有肿瘤细胞靶向性。最后，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法测定不同纳米粒对细胞内Ｂｃｌ２，ｂａｘ，ｃａｓｐａｓｅ３ 和ＣＯＸ２蛋白的相对表达效率。结果显示，实验组与对照组相比，促凋亡蛋白ｂａｘ和ｃａｓｐａｓｅ３显著增加，抗凋亡蛋白Ｂｃｌ２ 显著下降，ＣＯＸ２蛋白的表达也相应降低，尤其以ＤＴＸ／ｓｉＣＯＸ２／ＨＲＰＳＰＮＰｓ组最为明显（Ｐ＜００１），实现了小分子药物和 ｓｉＲＮＡ协同特异性治疗的目的。 关键词　ＣＯＸ２；小分子干扰ＲＮＡ；多西他赛；纳米粒；还原敏感；凋亡；聚乙酰亚胺；聚乳酸羟基乙酸共聚物 中图分类号　Ｒ９４４　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１６）０４－０４２９－０８ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　李亚楠，王珏，李霁，等共载 ｓｉＲＮＡ与多西他赛的透明质酸修饰的还原敏感型纳米粒质量评价［Ｊ］．中国药科大学学报， ２０１６，４７（４）：４２９－４３６ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＬＩＹａｎａｎ，ＷＡＮＧＪｕｅ，ＬＩＪｉ，ｅｔａｌ．ＣｏｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｓｉＲＮＡａｎｄｄｏｃｅｔａｘｅｌｂｙｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｉｆｉｅｄｒｅｄｏｘｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１６，４７（４）：４２９－４３６ ＣｏｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｓｉＲＮＡａｎｄｄｏｃｅｔａｘｅｌｂｙｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｉｆｉｅｄｒｅｄｏｘｓｅｎｓｉ ｔｉｖｅｄｉｓｕｌｆｉｄｅｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ １ ２ ３ １ １ ＬＩＹａｎａｎ牞ＷＡＮＧＪｕｅ牞ＬＩＪｉ牞ＳＨＥＮＹａｎ 牞ＴＵＪｉａｓｈｅｎｇ １ ２ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１００