养殖刺参腐皮综合征两种致病菌Dot2ELISA快速检测-海洋科学.PDF

养殖刺参腐皮综合征两种致病菌 DotEL ISA 快速检测 1 ,2 1 1 1 谢建军 , 王印庚 , 张 　正 , 荣小军 ( 1. 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室 , 中国水产科学研究院 黄海水产研究所 , 山东 青岛 26607 1 ;2 . 上海水产大学 生命科学与技术学院 ,上海 200090) ( ) ( 摘要 : 以养殖刺参 A p os tichop us j ap onicus 腐皮综合征两种主要致病原灿烂弧菌 V ibrio ) ( ) sp len d i d us 和假交替单胞菌 Pseu doal terom onas ni g rif aciens 为抗原 ,分别制备兔抗血清 , 建立了两种病原菌的点酶 EL ISA (DotEL ISA) 检测方法 。根据方正试验 ,确定检测用一抗 、 二抗最佳工作稀释度 :灿烂弧菌抗血清稀释度 320 ,酶标二抗稀释度 3 000 ;假交替单胞菌抗 血清稀释度 160 ,酶标二抗稀释度 2 000 。阻断试验结果表明两种抗血清特异性均较高 。灿 烂弧菌抗血清在稀释度为 40 时与溶藻胶弧菌 、河流弧菌 、创伤弧菌等弧菌发生微弱交叉反 应 ,提高稀释度到 160 时 ,不发生交叉反应 。假交替单胞菌抗血清基本不与常见海水致病弧 菌发生交叉反应 。人工感染试验检测结果表明该方法能从患病海参溃烂组织 、未发病海参 3 组织和感染水体检测到相应致病菌 ,检测灵敏度为 9 . 4 ×10 个/ mL 。人工感染试验检测结 果经直接凝集反应验证 。该方法操作简便 、灵敏度高 ,不需复杂仪器设备 ,适合在基层推广 。 ( ) ( ) 关键词 :刺参 A p os tichop us j ap onicus ;腐皮综合征 ;灿烂弧菌 V ibrio sp len d i d us ;假交替 ( ) 单胞菌 Pseu doal te rom onas ni g rif aciens ;DotEL ISA ;快速检测 中图分类号 :S94 1. 42 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2007) 　　2 1 世纪初 ,刺参养殖在中国北方沿海蓬勃兴起 , 操作简便 、结果容易判读等优点 ,在动物疾病诊断上 迅速发展成为中国最重要的海水养殖品种之一 ,2004 有广泛应用[4 ] 。 年山东辽宁两省养殖刺参年产值超过 100 亿元 ,取得 本试验首次通过 DotEL ISA 方法对养殖刺参两 了显著的经济和社会效益[ 1] 。由于刺参养殖规模的 种病原菌进行检测 ,探讨该方法在刺参疾病临床诊断 迅速扩张 ,病害防治等配套技术相对滞后 ,加上生产 应用的可行性 。 过程中的不规范操作 ,导致