食管外膜成纤维细胞原代培养报告.pdf

食管外膜成纤维细胞的分离、培养和鉴定 SD 材料和试剂：来源： 大鼠 手术器材：手术剪 （镊）、解剖镊、眼科剪 （镊）、显微镊 清洗液：PBS 培养液：DMEM 添加20%FBS 200IU 双抗 破红液：常规配方 1 300uL 3 SD 具体操作： 、将 的 ％戊巴比妥注入 大鼠体内，待大鼠麻 醉至昏厥状态时，将大鼠转入75%的酒精最浸泡5min。 2、在无菌条件下，将大鼠放置于泡沫板上，四肢用针头固定。 3、用左手持直头眼科镊子夹住大鼠腹部最下方的皮毛，右手 拿手术剪将大鼠的皮剪开，沿着腹部下方一直剪至大鼠下颚。 4、左手换一个无菌的弯头眼科镊子夹住最下方的腹腔，右手 拿另一个无菌的手术剪将大鼠的腹腔剪开，剪开胸膜，扒开左肺叶， 找到食管，剪取食管的胸段部分。 5、在无菌条件下，左手拿直头显微镊子将食管轻轻固定，右 手拿弯头显微镊，除去连在食管外壁的结缔组织，用预冷的PBS清 3 洗 次。 6、左手拿直头显微镊子，轻轻夹住食管，右手拿弯头显微镊 子将食管的外膜和中膜分离，再用左手显微镊夹住中膜部分，用右手 将剩下的半截外膜从中膜上剥离。 7、左手拿直头显微镊子将分离的外膜轻轻固定，右手用动脉 1mm PBS 2-3 剪剪成 ³大小的组织块后，再用 清洗 次。 8 6 3mm 、将组织块植入 孔板，组织块之间的间隙在 ³左右， 6 2 用枪头吸取多余的液体，将 孔板倒扣在培养箱中 小时，加入培养 1mL 5 5 液 静置培养 天， 天即可观察到食管外膜成纤维细胞爬出，如 图所示。 9 5 6 、 天后移去组织块，待细胞长满 孔板后，用时差贴壁法 纯化细胞，细胞纯度达90%以上后，可冻存保种。 图1.源自SD 鼠食管组织的食管成纤维细胞 武汉云克隆诊断试剂研究所