红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化JNK表达的影响.doc

　　红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化JNK表达的影响 ：吴成云，张近波，李智强，戴元荣 【摘要】 目的 ：探讨哮喘大鼠外周血单个核细胞(PBMCs) JNK磷酸化表达的变化及红霉素对其影响。方法：分离培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的PBMCs。分别采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-4，IL-5浓度，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Cs JNKmRNA、磷酸化JNK的表达。结果：哮喘组PBMCs JNK磷酸化蛋白、mRNA表达水平及细胞上清液中IL-4，IL-5的浓度较正常对照组显著升高(P lt;0.05)，红霉素处理组JNKmRNA、磷酸化蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4，IL-5的浓度较哮喘组显著降低(P lt;0.05)。通过直线相关分析发现，PBMCs JNK磷酸化蛋白与细胞上清液中IL-4，IL-5的表达水平之间均呈显著正相关(r分别为0.74和0.66，P均lt;0.05)。结论：JNK可能参与支气管哮喘的病理生理过程。红霉素可能通过作用于JNK这一靶点发挥其抗炎效应。 【关键词】 支气管哮喘;外周血单个核细胞;JNK蛋白激酶;红霉素 　　Abstract: Objective: To study the changes of the expression of JNK mitogen-activated protein kinase (JNK-MAPK) in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in rats a and the effects of erythromycin on it. Methods: PBMCs rats a，normal subjects and erythromycin-treated group. The levels of protein of IL-4，IL-5 in plasma， JNKmRNA and protein of JNK in PBMCs e linked immunosorbent assay (ELISA)， reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and RNA、phosphor-JNK in PBMCs and the concentration of IL-4， IL-5 in supernatants atic group than those in normal group (P lt;0.05). By erythromycin treated，the above indexes atic group (P lt;0.05). There ay play a role in pathophysiological process of asthma. Erythromycin can effectively treat asthma through inhibiting the expression of p-JNK. 　　Key a;peripheral blood mononuclear cells;JNK mitogen-activated 　　protein kinase; erythromycin 　　支气管哮喘是多种炎性细胞和细胞因子参与的气道慢性炎症。炎症学说的确立， 给哮喘的防治和研究带来了很大的进展。已有的研究发现， 淋巴细胞等炎症细胞及其产生的多种细胞因子(IL-4和IL-5等)和炎症递质参与了哮喘的发病过程[1]。以红毒素、罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等为代表的14环、15环大环内酯类抗生素对支气管哮喘有较好的 治疗 作用，可以改善哮喘患者的临床症状， 降低气道高反应性。然而其确切的作用机制尚未明确， 有 文献 表明，其抗哮喘作用可能与非抗菌性抗炎作用有关[2-3]。但有关红霉素对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)JNK表达的影响目前尚未见报道，本研究通过复制卵白蛋白(OVA)致敏的哮喘大鼠模型， 探讨红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞JNK表达的影响。 　 　1 材料和方法 　　1.1 材料 OVA(Sigma公司);乳糖酸红霉素(大连美罗制药公司);磷酸化JNK和JNK多克隆抗体(Santa Cruz公司);Cs分离、培养 无菌抽取肝素(30 U/mL)抗凝大鼠下腔静脉血5 mL，以淋巴细胞分离液分离PBMCs。离心洗涤后，用RPMI-1640培养基调细胞浓度为1×106 /L，培养体系中加刺激物PHA 10μg/mL，接种于6孔培养板内，相应分为正常对照组、哮喘组和红霉素处理组(即加入终浓度为15μg/mL的红霉素共同培养)。置于5% CO2、37 ℃培