罗格列酮对高胆固醇血症大鼠心肌脂联素与TNFα水平的影响.doc

　　罗格列酮对高胆固醇血症大鼠心肌脂联素与TNFα水平的影响 ：盛祖龙，胡定波，李荥娟，李艳志，任利群 【摘要】 　　目的：探讨高胆固醇血症大鼠心肌脂联素与TNFα水平变化及罗格列酮对其的干预作用。方法：28只雄性ethods:Hypercholesterolemic rats ale oreover,myocardial adiponectin ay exert myocardial protective action partially at least through the improvement of lipid metabolism,the increase in myocardial adiponectin and the reduction in myocardial TNFα level in the hypercholesterolemic rat. 　　［Key or; necrosis; factorα; hypercholesterolemia; rosiglitazone; rats 　　过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）是配体激活的核转录因子，属于核受体超家族成员之一。噻唑烷二酮类药物（TZDs），包括罗格列酮、匹格列酮、曲格列酮等是PPARγ的配体激动剂。动物及临床研究均证实,TZDs类药物通过保护血管内皮功能、调节炎性细胞因子及表面黏附分子的表达、抑制巨噬细胞活化、抗氧化应激及抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，从而抑制动脉粥样硬化（AS）的发生 发展 。脂联素(adiponectin)是由白色脂肪组织细胞分泌的一种具有心血管保护作用的细胞因子。近年研究发现，脂联素具有抗炎、胰岛素增敏、抗动脉粥样硬化等重要作用［1-2］，因此得到广大研究者的关注。肿瘤坏死因子(TNFα)是人们早已熟知的炎症介质之一，通过损伤内皮细胞、促进凝血、抑制纤溶、促进单核细胞对内皮细胞的黏附以及促进血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、增殖等作用，参与动脉粥样硬化的发生、发展过程；另外，研究证实TNFα可降低血清脂联素水平。然而PPARγ配体激动剂罗格列酮干预后却显著抑制TNFα引起脂联素基因表达的下降［3］。本研究拟借助实验性高胆固醇血症大鼠模型，观察心肌组织局部脂联素和TNFα水平的变化以及罗格列酮对其的干预作用，进一步探讨罗格列酮心肌保护作用的分子机制。 　　 1 材料和方法 　　1.1 高胆固醇血症大鼠模型的建立 　　4周龄健康雄性g·kg-1·d-1）干预，持续5个月，所有鼠自由饮水。罗格列酮溶于1 ml生理盐水中清晨灌胃，每天1次。6个月时Cho组体重明显高于其余两组，腹型肥胖为特征，平均血总胆固醇为(4.7±0.6) mmol·L-1，明显高于普通饲料组以及正常大鼠血清胆固醇的平均值(2.41±0.05) mmol·L-1，提示造模成功。高胆固醇饲料由10%食用猪油、4%胆固醇、0.5%牛胆酸与85.5%普通饲料搅拌混匀配制而成，烘干制成颗粒状饲料。 　　1.2 血脂测定 　　禁食12 h，处死前首先 电子 秤称体重。采用去脊髓法使大鼠丧失意识，立即左心室穿刺取血10 ml，4 ℃、10 000×g离心15 min，分离血清，-80 ℃保存。采用全酶法全自动生化分析仪测定TG（三酰甘油）、TC（总胆固醇）、LDLC（低密度脂蛋白）水平。 　　1.3 心肌脂联素和TNFα水平的测定 　　取左室心肌组织50～100 mg，加生理盐水0.5～1 ml，匀浆器10 000×g低温匀浆，按1∶15的比例［V(ml)/g)］加入浓度为0.2 mol·L-1的冰醋酸，煮沸15 min，4 ℃、10 000×g离心15 min，取上清液分装，-80 ℃保存成批测定。采用酶联免疫吸附法测定心肌组织中脂联素和TNFα水平（脂联素ELISA试剂盒购自ADL公司，TNFα ELISA试剂盒购自晶美公司）。心肌组织脂联素和TNFα水平按照下述公式 计算 ：心肌组织脂联素（μg·mg-1）水平=上清液中脂联素（μg·ml-1）浓度/上清液总蛋白含量（mg·ml-1）;TNFα（pg·mg-1）水平=上清液中TNFα（pg·ml-1）浓度/上清液总蛋白含量（mg·ml-1）。考马斯亮蓝法测定心肌组织上清液中总的蛋白含量。 　　1.4 统计学处理 　　计量资料以x-±s表示，数据用SPSS 13.0统计软件处理,Oneway ANOVA方法进行组间差异显著性检验，Pearson进行相关分析，Plt;0.05为差异有统计学意义。 　 　2 结果 　　2.1 血脂水平 　　与Con组相比，高胆固醇饲养6个月引起明显的高胆固醇血症，包括TG、TC和LDL