肾清饮对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠肾脏TGFβ1及TIMP1表达的影响.doc

　　肾清饮对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠肾脏TGFβ1及TIMP1表达的影响 【关键词】 肾清饮;肾间质纤维化;转化生长因子β1;金属蛋白酶组织抑制物1 　　ABSTRACT: Objective To study the possible mechanism of Shenqingyins inhibiting renal interstitial fibrosis. Methods Renal interstitial fibrosis in rats inistration of adenine, and then the rats underade the pathological examination of renal tissues, used immunohistochemistry and RTPCR to observe the expressions of transforming groetalloproteinase1 (TIMP1) in renal tissues. Results The degree of renal interstitial fibrosis ilder in Shenqingyin group than in model control group. Immunohistochemistry and RTPCR results shoodel control group (Plt;0.05). Conclusion Shenqingyin can inhibit renal interstitial fibrosis by decreasing the expressions of TGFβ1 and TIMP1 in the kidney. 　　KEY P1) 　　肾间质纤维化是各种原因引起的肾脏疾病持续进展并最终 发展 成为终末期肾病的共同途径和主要病理基础[1]。肾间质纤维化的治疗药物种类较多，但疗效并不满意。中药肾清饮的临床观察结果显示，该药能有效地保护肾功、延缓肾衰竭的进展。本研究通过建立腺嘌呤灌胃致大鼠肾间质纤维化模型，给予中药肾清饮干预治疗，观察肾清饮对肾组织转化生长因子β1 (transforming groetalloproteinase1, TIMP1)的影响，探讨肾清饮抗肾间质纤维化的部分机制。 　　 1 材料与方法 　　1.1 实验动物、主要试剂及药品 雄性SD大鼠56只，体重180～200g，清洁级，由西安 交通 大学医学院实验动物中心提供。造模试剂药品：腺嘌呤(Amerisco公司);肾清饮(黄芪、当归、川芎、藏红花、大黄、芍药、地龙等中药组成)，制成水煎浓缩液，每毫升含生药2.4g，4℃冰箱保存备用;盐酸苯那普利(北京诺华制药有限公司)。ET1放免试剂盒(北京科美东雅生物技术有限公司)。RTPCR试剂：总RNA提取Trizol试剂(Invitrogen公司)，逆转录试剂盒及Taq DNA聚合酶(Fermentas/MBI公司)。引物设计：①3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)上游5′CATAGACAAGATGGTGAAGG3′，下游5′TCCACAGTCTTCTGAGTGGC3′，570bp;②COLⅠ上游5CCTACAGCACGCTTGTGGAT3，下游5′ATTGGGATGGAGGGAGTTTA3′，193bp;③COLⅢ上游5′TCAAGAGCGGAGAATACTGG3′，下游5′TATGTAATGTTCTGGGAGGC3′，295bp;④TGFβ1上游5′AGCCTGCTTCTTGAGTC3′，下游5′AGGAAAGGTAGGTGATA3′，241bp。引物由上海生物工程公司合成。 　　1.2 动物分组和标本采集 56只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肾清饮预防组、肾清饮低剂量组、肾清饮高剂量组、盐酸苯那普利组、肾清饮+盐酸苯那普利组，共7组，每组8只，其中后5组统称药物干预组。腺嘌呤：腺嘌呤用20g/L淀粉悬液配成，灌胃剂量250mg/(kg·d);肾清饮(低)：按生药折算每100g大鼠体重灌胃肾清饮1g/d;肾清饮(高)：按生药折算每100g大鼠体重灌胃肾清饮3g/d;盐酸苯那普利：盐酸苯那普利灌胃10mg/(kg·d)。造模过程中正常对照组、肾清饮低剂量组、肾清饮+盐酸苯那普利组各死亡大鼠1只，模型组死亡2只。6周结束前1d，将大鼠置于代谢笼中收集24h尿液。6周结束时乙醚麻醉大鼠，下腔静脉采静脉血，取双肾，部分置于40g/L多聚甲醛固定，部分液氮冻存。 　　1.3 病理染色及免疫组化检测 固定于40g/L多聚甲醛的肾组织，经脱水，包埋，切成4μm的切片，进行