血小板GPⅡb-Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对GPIIb-IIIa活化的影响.doc

　　血小板GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对GPIIb/IIIa活化的影响 杨国雷1 尹松梅2 张复华1 牛国敏1 凌奕文1 1.南方医科大学附属南海医院血液内科，广东佛山 528200; 2.中山大学附属第二医院血液内科，广东广州 510120 [摘要] 目的 探讨GPⅡb/Ⅲa 拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对ADP诱导的血小板GPⅡb/Ⅲa活化的影响。方法GP II b／11I a特异性抗体PAC-1标记活化GP II b／11I a，流式细胞仪检测静息及 ADP（ 5μmol/L)诱导的血小板PAC-1表达率。结果 静息状态下的血小板PAC-1表达率为(0.80±0.85)％；在ADP（5 μmol/L）激动下，PAC-1表达率为(77.27±9.47) %；RGDS以浓度依赖性的方式抑制PAC-1 表达率，IC50值为206 μmol/L；Nifedipine能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1 表达率，IC50值为178 μmol/L；RGDS联合Nifedipine对PAC-1 表达的联合抑制率为（60.15±16.35）％，二者的交互效应差异有统计学意义（Plt;0.05）。 结论GPIIb/IIIa受体拮抗剂RGDS和Ca2+拮抗剂Nifedipine均抑制ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化，其抑制作用呈浓度依赖性，随拮抗剂浓度增加抑制作用增强；两者对血小板GPIIb/IIIa活化的抑制存在协同作用。 .jyqka）；Mouse IgM：FITC、PAC-1 FITC（FITC标记活化GP II b／11I a特异性抗体），CD61：PerCP，（美国 BDIS）。FACSort型流式细胞仪 （B-D 美国）。 1.3实验方法 1.3.1血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa测定ACD液抗凝静脉血2 mL，分成每份90 μL，加入ADP(5 μmol/L)孵育5min,实验组加入PAC-1：FITC、CD61：PerCP,对照组分别加入Mouse IgM：FITC、 CD61：PerCP 染色，室温下作用20 min ,立即加入2～8℃的％甲醛溶液1 mL,置 2～8 ℃冰箱内固定30 min，24 h内上机检测。每次检测时取5 μL标本，以CD61PerCP/SSC双参数设门,检测PAC-1阳性血小板的百分率[2]。 1.3.2RGDS、Nifedipine单独对血小板PAC-1表达率的作用 制备处理标本同上，静息组不加ADP直接测定， 对照组加入ADP，药物组分别加入5种不同浓度的 RGDS（50、100、200、400、800 μmol/L）,Nifedipine（10、20、40、80、160 μmol/L）于37 ℃ 孵育10 min后加入ADP；其余各步骤相同。 1.3.3RGDS联合Nifedipine对血小板PAC-1表达率的联合作用 制备处理标本同上， 药物组同时加入RGDS（200 μmol/L）及 Nifedipine（160 μmol/L）于37 ℃孵育10 min后加入ADP；其余各步骤相同前。 1.3.4Nifedipine(160μmol/L)和RGDS(200 μmol/L)对血小板PAC-1 表达率的联合作用Nifedipine(160 μmol/L) 对血小板PAC-1抑制率为（44.35±22.81）%；RGDS(200 μmol/L) 对血小板PAC-1 的抑制率为（51.64±17.14）%;二者对血小板PAC-1的联合抑制率为（60.15±16.35）％，经析因设计的方差分析，二者的主效应与交互效应差异有统计学意义（Plt;0.05）。即二者对PAC-1 表达率的抑制存在协同作用。 1.4统计方法 计量资料的描述用均数±标准差（x±s）表示；PAC-1表达抑制率=[(对照组PAC-1表达率一用药后PAC-1表达率)/对照组PAC-1 表达率]x100％。不同浓度药物的单独效应用随机区组设计的方差分析；联合效应用析因设计的方差分析；所有数据均用SPSS 16.0统计软件处理。 2结果 2.1ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化 正常人，静息状态下的血小板PAC-1表达率为(0.80±0.85)％；在ADP（5 μmol/L）激动下，PAC-1表达率增高,为(77.27±9.47) %。 2.2RGDS对血小板PAC-1 表达率的作用 5种不同浓度的 RGDS对PAC-1 表达率均有抑制作用，IC50值为206 μmol/L。随着RGDS浓度的增加，抑制作用增强，经随机区组设计的方差分析及SNK法多重对比，各浓度的效应有统计学意义，即RGDS能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1 表达率。 2.3Nifedipi