钴铬离子对成骨细胞细胞毒性及对其分泌骨保护素及其配体的影响.doc

　　钴铬离子对成骨细胞细胞毒性及对其分泌骨保护素及其配体的影响 ：戴闽，袁晓军，程细高，张斌，詹平，漆启华，熊建卫 【摘要】 [目的]观察金属Co2+、Cr3+离子对小鼠成骨细胞(MC3T3E1)的细胞毒性以及在Co2+、Cr3+离子刺激下对成骨细胞分泌RANKL、OPG的影响。[方法]体外培养成骨细胞。MTT法检测细胞活力。ELISA法对培养上清液RANKL、OPG浓度进行检测。[结果]MTT显示与对照组相比，钴铬离子使成骨细胞的细胞活力明显下降。成骨细胞暴露在钴铬离子下，与对照组相比，24 h、48 h后：OPG的分泌分别增长32.1%、17.8%(Plt;0.05);RANKL的分泌量分别是对照组的61.6倍、13.8倍(Plt;0.05);RANKL/OPG比率分别升高51.4倍、12.3倍。[结论]金属离子对成骨细胞有细胞毒性，可刺激成骨细胞释放RANKL、OPG，并上调RANKL/OPG的比值。 【关键词】 钴离子; 铬离子; 成骨细胞; 骨保护素; 骨保护素配体 　　Abstract: [Objective]To investigate the cytotoxicity of cobalt(Co2+) and chromium (Cr3+)ions on mice osteoblast(MC3T3E1)and the effects on the secretion of RANKL/OPG from osteoblast because of the stimulation of Co2+ and Cr3+ ions. [Methods]The osteoblast in vitri ethod supernatant.[Results]pared to the control,MTT test demonstrated that Co2+ and Cr3+ ions can obviously decrease the cell viability of osteoblast. -CSF(macrophage-colony stimulating factor)等，调节破骨细胞的分化与成熟。关于金属离子对无菌性松动作用的相关研究较少，本文主要通过体外试验来探讨小鼠成骨细胞暴露在金属钴、铬离子下对无菌性松动的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 CoCl2与CrCl3溶液的制备 用环氧乙烷消毒的CoCl2与CrCl3粉末溶解于无菌注射用水，配成CoCl2与CrCl3溶液。胎牛血清购于杭州四季青。小鼠成骨细胞MC3T3E1由南昌大学医学院药理研究所惠赠。 　　1.2 成骨细胞培养 小鼠成骨细胞常规培养于含10%胎牛血清的a-MEM培养基的培养瓶中，放入培养条件为37℃、5%的CO2孵箱中。每3 d换液1次，当瓶壁细胞丰度达80%左右后用0.25%的胰蛋白酶消化传代。 　　1.3 金属离子对成骨细胞的干预试验 待成骨细胞生长24 h贴壁后，对细胞进行换液。实验组给予含有的Co2+、Cr3+培养基，其终浓度根据Fleury等[1]的研究分别为10 ppm和150 ppm。对照组则加入不含有金属离子的培养基。 　　1.4 MTT比色试验 96孔板接种细胞，每孔6 000个，每组6孔，加入MTT液(5 mg/ml)20 μl/孔，37℃孵育4 h，吸去孔内液体，加入DMSO液体150 μl/孔，振荡10 min，用酶标仪选择490 nm波长测定各孔吸光值，其值与细胞数量成正比。 　　1.5 ELISA法检测上清液RANKL与OPG蛋白含量 分别培养24 h和48 h后收集上清液，按小鼠RANKL与OPG ELISA试剂盒说明书进行操作。 　　1.6 统计学分析 所有数据用均数±标准差，用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理。组间比较用随机设计的两样本均数比较，Plt;0.05为有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 MTT比色试验 　　结果见表1，与对照组相比，给以离子干扰后，细胞MTT实验的OD值明显下降，24 h、48 h、72 h分别下降22%、25%、45%，有统计学意义(Plt;0.05)。表1 各组MTT(OD值)测定结果 　　2.4 Co2+、Cr3++对成骨细胞RANKL/OPG比率的影响 　　Co2+、Cr3+与成骨细胞共培养24 h、48 h后与对照组相比，RANKL/OPG比率分别升高51.4倍、12.3倍。 图1对照组、离子组细胞培养24 h、48 h后分别收集上清液，检测OPG分泌量 图2对照组、离子组细胞培养24 h、48 h，分别收集上清液，检测RANKL分泌量 图3对照组、离子组细胞培养24 h、48 h RANKL/OPG比值3 讨论 　　无菌性松动是全髋关