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维普资讯 2卷第2 四川联 合 大 学 学报 (工程 科 学版 ) V 2 No 2 1998年 3月 】OURNALOFSICHUANUNIONUNIVERSIFY(ENGINEERINGSCIENCEED[T[0N) Mar 1998 博士生论文专栏 D(7，川 No．813产生的蛋白酶性质研究 ． 型 壁，何先祺 弓 (四川联合大学皮革工程系 戚都610065) 张义正 弋S (四川联合 石ii泵一成都610064) 摘 要 No813产生的蛋白酶最适 pH9，在pH8～11之闻稳定，属于微碱性蛋白 酶 【1J。最适温度在50℃，50℃ 下较稳定。在 50℃、60℃处理 l0分钟、酶活力损失 约 50％。0003Mc日 的存在使酶 的热稳定性和 pH稳定性均有所提高。c 、 c 、F 、Cu 对酶有抑制作用．其中C 是强抑制剂。Mn 有明显激 活作用， EDTA(1×10 M)．PM汀 (1×10 M)对酶均有抑制作用，此酶可水解多种天然蛋 白．如腔原蛋白，牛血清蛋白，鸡蛋清，酪蛋白等，但不水解溶菌酶。表面活性剂如洗 衣柑、JFC对酶活无影响甚至还有轻微激活作用。 孝讣娄竺号．Q555性质j一￡ 堕苎塑 制芊 毛 为推动新型酶法脱毛的实施，以彻底消除目前灰碱法脱毛中硫化物污染，本课题组已 从制革厂盐腌猪皮上筛选到了一株脱毛效果良好的耐盐蛋白酶产生菌株。本文将对其产 生的蛋 白酶性质作较为深入的研究。 1 材料与方法 1，1 材料 No．813产生的蛋 白酶冻干样。 12 试剂 酪蛋白：EDTA 北京化工厂；PMSF：E．Merck公司产品 牛血清蛋白：中科院生物物理研究所，溶茁酶：上海禽蛋厂，胶原蛋白：上海生化制药 厂，缓冲液为广泛pH[。 收稿 日期 1997—02—26 维普资讯 108 四川联合大学学报(工程科学版) 第 2卷 第2期 13 方法 1．3．1 粗酶制备 N0_813按最佳发酵条件发酵481、时发酵液器 上清液 箍 4℃ 过夜 蓦丽沉淀嚣錾冷冻干燥一浅棕色蓬松状粗酶 1．3．2 活力测定 Fol[n试剂里显色法 ：取 lm1(40C预热4分钟)液加入2m1(40C预热4分钟)2％酪 蛋白溶液，混合后在 40(2反应 10分钟．加 3ml10％三氯乙酸 (1、：A)终止反应 (以失活酶 作对照)．取 lml滤液加5ml0．55Na2CO3溶液，加lmlFolin试剂．40(2显色 15分钟． 在 72 一 型分光光度计波长上 680rim处比色，测OD㈣。以每毫升酶液在上述条件上水解酪蛋 白．每分钟产生的酪氨酸微克数为 1个酶活力单位，用( m1)表示。 2 结果与讨论 2．1 酶的粗制品 No-813产生的蛋白酶经 65％硫酸铵沉淀．透析，冷冻干燥后蛋 白酶活力由400 提 高到450％,／mI活力回收率为38％。 2．2 pH爰温度对酶活力的影响 以酪紊作底物．用0．1M 不同pH值缓冲液配制成2％浓度的溶液，按 Folin法测活 力。从表 l中可以看出．最适作用pH为9．最适温度为 50(2。 表 1 不同沮度和pH位下的蛋白醵活力f mI) 单位 ：~,／ml 2．3 pH对酶稳定性影响 将 0．1M不同pI-I缓冲液配制的酶液在 40(2放置 60分钟，50(2放置 30分钟， 然后测 定剩余酶活力。结果见图1，此酶在