浙贝乙素及其衍生物对豚鼠支气管平滑肌环磷酸腺苷影响.docVIP

浙贝乙素及其衍生物对豚鼠支气管平滑肌环磷酸腺苷影响摘要：目的：观察浙贝乙素及其衍生物对豚鼠支气管平滑肌内环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响。方法：采用氧化铝柱层析法分离环磷酸朦苷(cAMP)，利用紫外分光光度法计算环磷酸腺苷(cAMP)的生成或消耗量来表示腺苷环化酶(AC)和磷酸二酷酶(PDE)的活力。结果：浙贝乙素衍生物各样品对腺苷环化酶(AC)的影响很低，对磷酸二酯酶(PDE)有抑制作用，从而提高环磷酸腺苷(cAMP)的水平。结论：浙贝乙素衍生物通过提高支气管平滑肌细胞内环磷酸腺苷的水平产生平喘作用。 关键词：浙贝乙素；衍生物；环磷酸腺苷；腺苷环化酶；磷酸二酯酶 中国分类号：R285.5 文献标识码：A 　文章编号：1673-7717(2007)12-2484-02 浙贝乙素(verticinone)是湖北贝母中的主要生物碱，其含量达生药材的0.3％，另外，贝母属植物中的另一主要生物碱浙贝甲素与浙贝乙素为酮和醇的关系，浙贝甲素很容易转变为浙贝乙素，两者含量之和占总生物碱含量的80％以上，两者提取分离方法在工业上也简单易行。药效学实验表明浙贝乙素具有较好的镇咳、祛痰、平喘之功效的结论，整体效果明显。因此，浙贝乙素含量高、活性较好、结构明确。 笔者以浙贝乙索为先导化合物，进行结构改造和结构修饰，合成了3β-乙酰化浙贝乙素(PE-D1)、3β-丙酰化浙贝乙素(PE-D2)、3β-丁酰化浙贝乙素(PE-D3)、3β～苯甲酰化浙贝乙索(PE-D4)、氧化浙贝乙素(PE-D5)、3β-丁氧羰基化浙贝乙素(PE-D6)等6个浙贝乙素衍生物，经理化常数测定及FAB-MS、H-NMR、DEPT等波谱技术分析及相关的化学反应，鉴定了它们的结构。在此基础上，笔者研究了浙贝乙素及其衍生物的镇咳、祛痰、平喘活性(衍生物编号PE～D1～6)。结果表明：(1)镇咳活性(3mg/kg)：PE-D1-6与阴性比较有显著性差异，且强于浙贝乙素；(2)祛痰活性(3mg/kg)：PE-D1与阴性比较有显著性差异。强于浙贝乙素。(3)平喘活性(3mg/kg)：PE-D1和PE-D3-6与阴性比较有显著性差异，其中PE-D1的平喘活性最强且明显强于浙贝乙素。结论：PE-D1(乙酰化浙贝乙素)具有很强的镇咳、祛痰、平喘活性，远强于浙贝乙素，整体效果明显，是一种很有开发前途的高效镇咳、祛痰、平喘药物。 环磷酸腺苷(cAMP)在支气管张力改变及预防高气道反应中具有重要作用。细胞内的环磷酸腺苷(cAMP)的水平取决于腺苷环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)。本实验用氧化铝柱层析从各种核苷酸中分离CAIYLP，然后在260nm波长下测定吸光度来计算cAMP的生成或消耗量，表示AC或PDE的活力，从而研究浙贝乙素衍生物的平喘机理。 1.实验材料 浙贝乙素，由本课题组从湖北贝母中提取分离并鉴定，经HPLC测定纯度为99.17％；浙贝乙素衍生物，3β-乙酰化浙贝乙素(PE-D1)、3β-丙酰化浙贝乙素(PE-D2)、3β-丁酰化浙贝乙素(PE-D3)、3β-苯甲酰化浙贝乙素(PE-D4)、氧化浙贝乙素(PE-D5)、3β-丁氧羰基化浙贝乙素(PE-D6)均由本课题组合成并鉴定，经HPLC测定纯度均在98％以上；cAMP(SIGMA CHEMICAL CO.)，ATP(凌飞科技公司)；豚鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，体重200～250g；AC底物液的浓度为0.5mMATP，10mM NaF，33mM MgS04，50mM Tris-HCI缓冲溶液(pH7.4)；PDE底物液的浓度为lmM cAMP，33mM MgSO，50mM Tris-HCl缓冲溶液(pH7.4)。在反应中研究药物的浓度为0.9mg/mL，药物用酶底物液稀释，在酶反应开始前加入酶底物液中。 2.标准曲线的制定 精密称取cAMP0.0041g，置于25mL容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容，配制成0.5nM的溶液，再分别精密吸取3.03、0.06、O.10、O.30、0.50、1.00mL该溶液于5mL容量瓶中并定容，用WFZ800-D3B紫外分光光度计测定各自的吸光度，结果见表1。 以吸光度(A)对cAMP的含量(x)回归，得回归方程为A=13.512X+0.0314，r=0.9999，吸光度(A)对cAMP含量(x)有直线关系。 3.实验方法 处死豚鼠，迅速取出气管支气管组织，用生理盐水洗去血液，保留肺门以下支气管组织，以1：10的比例，加入0.32M蔗糖溶液，在冰浴下匀浆，细胞达到完全破碎为止，匀浆液10000r/min离心15min，倾出上清液，沉淀物用上清液相等体积的0.32M的蔗糖溶液悬浮，分装后置-30℃下低温保存，两周