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华北农学报 ·2017,32(3):65-69
萼脊兰MADS-box 基因的克隆及表达载体构建
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蒋素华 ,黄 萍 ,王默霏 ,梁 芳 ,许申平 ,崔 波
(1.郑州师范学院生物工程研究所,河南 郑州 450044;2.河南农业职业学院,河南 郑州 451450)
摘要:为了研究“ABC”模型的B类PI基因,探究决定花瓣和雄蕊形成的基因特征。 采用CTAB法提取萼脊兰花
瓣总RNA,并通过RT-PCR法克隆萼脊兰PI基因的编码序列,该序列长度为633 bp,编码210个氨基酸,与小兰屿蝴
蝶兰的氨基酸相似性最高。 对 PI 所表达蛋白质的结构、亲水性和二级结构进行了分析,结果显示,该基因包含
MADS-box和K-box 保守结构域,属于MADS-box 基因家族;该蛋白分子属于亲水性蛋白,包含 56. 19% α 螺旋、
13.81% 的延伸链以及30%的不规则折叠,实时荧光定量PCR结果显示,PI基因主要在花器官中表达,且表达量高,
说明PI基因的表达具有组织特异性。 构建植物表达载体的结果显示,目的基因和带启动子的片段已插入到表达载体
pCAMBIA1301中,表明成功构建植物表达载体1301-PI,为最终获得新奇花型的萼脊兰奠定基础。
关键词:萼脊兰;PI基因;克隆;表达分析;表达载体
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中图分类号:Q949.71 8.43;Q78 文献标识码:A 文章编号:1000-7091(2017)03-0065-05
doi :10.7668/ hbnxb.2017.03.010
Cloning and Construction of Expression Vector ofMADS-box
Gene from Sedireajaponica
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JIANG Suhua ,HUANG Ping ,WANG Mofei ,LIANG Fang ,XU Shenping ,CUI Bo
(1.Institute of Biotechnology,Zhengzhou Normal University,Zhengzhou 450044,China;
2.Henan Vocational College of Agriculture,Zhengzhou 451450,China)
Abstract:In ordertostudytheBtypePI geneof ABC model,andexplorethegenecharacteristicsofpetals
and stamen formation.In the study,using CTAB approach to extract the total RNA of the petal of Sedireajaponica,
and cloning the part-length cDNA sequences of PI gene of Sedireajaponica by using RT-PCR approach.It found
that the length of this gene sequence was 633 bp,it encoded 210 putative amino acid residues and the gene se-
quence had ahighhomologywithPhalaenopsis equestris after sequencealignment.Afteranalysisofthestructureand
the hydrophilic and the secondary structure of PI protein,it found that the gene seque
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