乳酸菌的筛选与鉴定.ppt

乳酸菌的筛选与鉴定 4-5人一组 共3组 150ml 无菌水 200ml 培养基 9个平板 1ml移液管 若干支 10ml移液管若干支 试管若干支 灭菌：药勺、剪刀、4个小烧杯 材料：火腿、文山湖水样、植物叶片、花朵、果实等 乳酸菌简介 乳酸菌的分类 乳酸菌泛指能发酵糖生成乳酸的细菌，分布非常广泛，发酵食品、植物、动物、自然水体中均有分布。大致包括下列属：乳杆菌属（Lactobacillus）、链球菌属（Streptococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、片球菌属（Pediococcus）等。 多数乳酸菌为有益菌，在保健品的生产、发酵工业以及农业生产中应用广泛。 乳杆菌属（Lactobacillus） 形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状，一般成链状排列。 运动性：通常不运动，有的能够运动，具有周生鞭毛。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：微好氧型。 链球菌属（Streptococcus） 形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或链状排列。 运动性：一般不运动。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：兼性厌氧型。 明串珠菌属（Leuconostoc） 形态：细胞呈球形或豆状，成对或链状排列。 运动性：一般不运动。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：兼性厌氧型。 双歧杆菌属（Bifidobacterium） 形态：细胞呈多样形态：Y形、V形、弯曲状、勺形，典型形态为Y形。 运动性：不运动。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：专性厌氧型。 片球菌属（Pediococcus） 形态：细胞呈球形，成对或四联排列。 运动性：不运动。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：兼性厌氧型。 乳酸菌的筛选 乳酸菌的分布 乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧菌，营养类型为化能异养型。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下： 与动物相关：乳汁、消化道、粪便等； 与植物相关：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等； 自然水体； 发酵食品：酸奶等。 筛选方法 利用碳酸钙溶解圈法筛选。 改良乳酸细菌培养基（MRS） 蛋白胨10.0 g，牛肉膏8.0 g，酵母膏4.0 g， 柠檬酸二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g， 吐温-60 1.0 mL，乙酸钠5.0 g， 磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.2 g，硫酸锰0.05 g，琼脂20.0 g，碳酸钙30 g， 加自来水至1000 mL，调pH 6.2~6.4。 方法 1）称10 g 材料（水样取1ml逐级稀释）剪碎、研磨，放入装有90 mL 无菌生理盐水的三角瓶中，在旋涡振荡器上充分混合均匀，即为稀释度为10-1 的样品液，继续将样品稀释至10-5。 2）分别吸取10-3、10-4、10-5 样品稀释液0.2 mL涂布在MRS 琼脂培养基上。置于37 ℃培养24 h。 3）挑取有透明圈的菌落，进行革兰氏染色。将革兰氏阳性菌在MRS 琼脂平板上划线，于37 ℃培养24 h。重复以上操作，直至得到纯菌落。 4）培养获得的乳酸菌，通过形态分析对菌种进行鉴定。 乳酸菌蛋白酶活性试验 在添加了15%脱脂乳或0.5%干酪素的MRS固体培养基中, 分别滴入0.2ml一定稀释度的试验菌液涂布均匀后,37℃ 恒温培养。当牛乳中酪蛋白分解时, 菌落周围会出现透明圈。 耐盐性试验 在添加质量分数为0%、2%、4%、6%、8%食盐的MRS平板, 划线接种分离菌种，在37 ℃ 培养24h后观察菌落生长情况。 分解脂肪的能力 MRS固体培养基中添加15%的猪脂肪和甲基红指示剂，稀释平板法接入供试菌后，于37C培养48 h，观察各种菌种有无红色斑点出现。 * * *